[發明專利]以二胺為橋基的葉酸修飾熒光染料探針的方法

有效

• 申請號: 201210412846.7
• 申請日: 2012-10-25
• 公開（公告）號: CN102925137A
• 公開（公告）日: 2013-02-13
• 發明（設計）人: 費學寧;曹凌云;郝亞超;谷迎春
• 申請（專利權）人: 天津城市建設學院
• 主分類號: C09K11/06
• 分類號: C09K11/06;C09B57/00;C09B23/06;C09B23/10
• 代理公司: 天津才智專利商標代理有限公司 12108
• 代理人: 呂志英

技術領域

本發明涉及化學及生物科學交叉領域，特別是一種以二胺為橋基的葉酸修飾熒光染料探針的方法。

背景技術

熒光分析方法由于具有靈敏度高，選擇性好，所需試樣量小等優勢，在分析化學，尤其是在生物分析中被廣泛應用。由于大多數生物分子本身熒光較弱或基本無熒光，檢測靈敏度較差，熒光探針技術應運而生。熒光探針技術指人們用強熒光的標記試劑或光生成試劑對待測物進行標記或衍生，生成具有高熒光強度的共價或非共價結合的物質。

隨著生物技術的不斷發展，熒光探針技術已經在核酸、蛋白質、細胞檢測免疫分析等領域得到了重要應用，表現出快速、靈敏、高通量和易自動化等特點。尤其近年來發展起來的熒光化學傳感器和分子信號系統的應用已深入到藥物學、生理學、環境科學、信息科學、生命科學等多個領域。

有機熒光染料如噻唑橙類（TO）染料、噁唑黃類（YO）染料和吲哚Cy類菁染料是目前常用的核酸標記類熒光染料，與現有的熒光標記試劑如羅丹明、熒光素等相比更具有優越性，主要表現在：(1)具有大的摩爾吸光系數和高的熒光量子產率，它們大多數在較低的濃度就可產生較強的熒光，可作為熒光探針與生物分子共價或非共價鏈接，分別形成偶聯物或復合物，使這些分子成為能用于細胞研究的理想熒光基團；(2)具有相對的光穩定性，不會在熒光顯微鏡下迅速猝滅；(3)類型多樣，結構具有多樣性和可變性，通過結構的改變可使其在生理條件下具有不同的水溶解性、穩定性、光譜性能等。

葉酸受體（FR）在腫瘤細胞中都有過度表達，而在正常組織中保守表達，利用葉酸受體（FR）與葉酸（FA）及其類似物高親合力結合的特性，將葉酸偶聯的熒光探針輸運到腫瘤組織，實現腫瘤組織的特異性靶向光學成像，這一熒光探針技術用于腫瘤細胞的早期識別是近年來備受關注的熱點之一。

熒光染料-葉酸這一結構的靶向熒光探針分子因價格昂貴，合成收率低，分離困難，成為制約其發展的瓶頸問題之一。

發明內容

為解決上述技術中存在的問題，本發明的目的提供一種以二胺為橋基的葉酸修飾熒光染料探針的方法，橋基二胺的存在，減小了葉酸修飾的熒光染料探針合成路線中，熒光染料和葉酸之間所存在的空間位阻效應，提高了熒光染料探針的合成產率。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案是提供一種以二胺為橋基的葉酸修飾熒光染料探針的方法，該方法是在葉酸修飾熒光染料探針的合成路線中實現的，其中：該方法將二胺作為橋基引入，橋基二胺的兩端分別與熒光染料和葉酸連接，構成熒光染料-二胺-葉酸結構的熒光探針；所述熒光染料為具有熒光探針特性且帶有-COOH基團的熒光染料；所述橋基二胺一端連接熒光染料，另一端連接葉酸。它們的連接方式為：通過二胺兩端的-NH₂分別與熒光染料及葉酸上的-COOH基團之間的酰胺反應實現熒光染料、二胺及葉酸三者的連接。

本發明的效果為該方法在葉酸修飾熒光染料探針的合成路線中，添加二胺作為橋基，增加熒光染料和葉酸之間的C鏈長度，減小染料分子和葉酸之間的空間位阻效應。這一做法可提高葉酸修飾的熒光染料探針合成產率，較未添加二胺橋基的合成路線，可提高5%～10%。

附圖說明

圖1為以二胺為橋基的葉酸修飾熒光染料探針方法的示意圖；

圖中：

1、熒光染料????2、二胺????3、葉酸????4、酰胺反應

5、熒光染料-二胺-葉酸結構的熒光探針

圖2以二胺為橋基的葉酸修飾TO類熒光染料探針的合成路線；

圖3以二胺為橋基的葉酸修飾YO類熒光染料探針的合成路線；

圖4以二胺為橋基的葉酸修飾Cy3菁染料熒光染料探針的合成路線；

圖5以二胺為橋基的葉酸修飾咔唑橋基類熒光染料探針的合成路線。

具體實施方式

結合附圖對本發明的二胺為橋基葉酸修飾熒光染料探針的方法的實現具體過程加以說明。

本發明的二胺為橋基葉酸修飾熒光染料探針的方法設計思想是基于在葉酸修飾熒光染料探針的合成路線中，添加二胺作為橋基，通過二胺兩端的-NH₂基團與熒光染料及葉酸上的-COOH基團之間的酰胺反應，熒光染料和葉酸上的-COOH基團分別與二胺兩端的-NH₂反應生成酰胺鍵而相連，實現熒光染料、二胺及葉酸三者的連接，從而構成熒光染料-二胺葉酸結構的熒光染料探針。二胺的加入增長了染料和葉酸之間的C鏈長度，減小甚至避免了熒光染料和葉酸直接相連時所存在的位阻效益，提高了探針分子的合成產率。