[發(fā)明專利]以二胺為橋基的葉酸修飾熒光染料探針的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210412846.7
• 申請日: 2012-10-25
• 公開（公告）號: CN102925137A
• 公開（公告）日: 2013-02-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 費(fèi)學(xué)寧;曹凌云;郝亞超;谷迎春
• 申請（專利權(quán)）人: 天津城市建設(shè)學(xué)院
• 主分類號: C09K11/06
• 分類號: C09K11/06;C09B57/00;C09B23/06;C09B23/10
• 代理公司: 天津才智專利商標(biāo)代理有限公司 12108
• 代理人: 呂志英

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及化學(xué)及生物科學(xué)交叉領(lǐng)域，特別是一種以二胺為橋基的葉酸修飾熒光染料探針的方法。

背景技術(shù)

熒光分析方法由于具有靈敏度高，選擇性好，所需試樣量小等優(yōu)勢，在分析化學(xué)，尤其是在生物分析中被廣泛應(yīng)用。由于大多數(shù)生物分子本身熒光較弱或基本無熒光，檢測靈敏度較差，熒光探針技術(shù)應(yīng)運(yùn)而生。熒光探針技術(shù)指人們用強(qiáng)熒光的標(biāo)記試劑或光生成試劑對待測物進(jìn)行標(biāo)記或衍生，生成具有高熒光強(qiáng)度的共價或非共價結(jié)合的物質(zhì)。

隨著生物技術(shù)的不斷發(fā)展，熒光探針技術(shù)已經(jīng)在核酸、蛋白質(zhì)、細(xì)胞檢測免疫分析等領(lǐng)域得到了重要應(yīng)用，表現(xiàn)出快速、靈敏、高通量和易自動化等特點(diǎn)。尤其近年來發(fā)展起來的熒光化學(xué)傳感器和分子信號系統(tǒng)的應(yīng)用已深入到藥物學(xué)、生理學(xué)、環(huán)境科學(xué)、信息科學(xué)、生命科學(xué)等多個領(lǐng)域。

有機(jī)熒光染料如噻唑橙類（TO）染料、噁唑黃類（YO）染料和吲哚Cy類菁染料是目前常用的核酸標(biāo)記類熒光染料，與現(xiàn)有的熒光標(biāo)記試劑如羅丹明、熒光素等相比更具有優(yōu)越性，主要表現(xiàn)在：(1)具有大的摩爾吸光系數(shù)和高的熒光量子產(chǎn)率，它們大多數(shù)在較低的濃度就可產(chǎn)生較強(qiáng)的熒光，可作為熒光探針與生物分子共價或非共價鏈接，分別形成偶聯(lián)物或復(fù)合物，使這些分子成為能用于細(xì)胞研究的理想熒光基團(tuán)；(2)具有相對的光穩(wěn)定性，不會在熒光顯微鏡下迅速猝滅；(3)類型多樣，結(jié)構(gòu)具有多樣性和可變性，通過結(jié)構(gòu)的改變可使其在生理?xiàng)l件下具有不同的水溶解性、穩(wěn)定性、光譜性能等。

葉酸受體（FR）在腫瘤細(xì)胞中都有過度表達(dá)，而在正常組織中保守表達(dá)，利用葉酸受體（FR）與葉酸（FA）及其類似物高親合力結(jié)合的特性，將葉酸偶聯(lián)的熒光探針輸運(yùn)到腫瘤組織，實(shí)現(xiàn)腫瘤組織的特異性靶向光學(xué)成像，這一熒光探針技術(shù)用于腫瘤細(xì)胞的早期識別是近年來備受關(guān)注的熱點(diǎn)之一。

熒光染料-葉酸這一結(jié)構(gòu)的靶向熒光探針分子因價格昂貴，合成收率低，分離困難，成為制約其發(fā)展的瓶頸問題之一。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明的目的提供一種以二胺為橋基的葉酸修飾熒光染料探針的方法，橋基二胺的存在，減小了葉酸修飾的熒光染料探針合成路線中，熒光染料和葉酸之間所存在的空間位阻效應(yīng)，提高了熒光染料探針的合成產(chǎn)率。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是提供一種以二胺為橋基的葉酸修飾熒光染料探針的方法，該方法是在葉酸修飾熒光染料探針的合成路線中實(shí)現(xiàn)的，其中：該方法將二胺作為橋基引入，橋基二胺的兩端分別與熒光染料和葉酸連接，構(gòu)成熒光染料-二胺-葉酸結(jié)構(gòu)的熒光探針；所述熒光染料為具有熒光探針特性且?guī)в?COOH基團(tuán)的熒光染料；所述橋基二胺一端連接熒光染料，另一端連接葉酸。它們的連接方式為：通過二胺兩端的-NH₂分別與熒光染料及葉酸上的-COOH基團(tuán)之間的酰胺反應(yīng)實(shí)現(xiàn)熒光染料、二胺及葉酸三者的連接。

本發(fā)明的效果為該方法在葉酸修飾熒光染料探針的合成路線中，添加二胺作為橋基，增加熒光染料和葉酸之間的C鏈長度，減小染料分子和葉酸之間的空間位阻效應(yīng)。這一做法可提高葉酸修飾的熒光染料探針合成產(chǎn)率，較未添加二胺橋基的合成路線，可提高5%～10%。

附圖說明

圖1為以二胺為橋基的葉酸修飾熒光染料探針方法的示意圖；

圖中：

1、熒光染料????2、二胺????3、葉酸????4、酰胺反應(yīng)

5、熒光染料-二胺-葉酸結(jié)構(gòu)的熒光探針

圖2以二胺為橋基的葉酸修飾TO類熒光染料探針的合成路線；

圖3以二胺為橋基的葉酸修飾YO類熒光染料探針的合成路線；

圖4以二胺為橋基的葉酸修飾Cy3菁染料熒光染料探針的合成路線；

圖5以二胺為橋基的葉酸修飾咔唑橋基類熒光染料探針的合成路線。

具體實(shí)施方式

結(jié)合附圖對本發(fā)明的二胺為橋基葉酸修飾熒光染料探針的方法的實(shí)現(xiàn)具體過程加以說明。

本發(fā)明的二胺為橋基葉酸修飾熒光染料探針的方法設(shè)計(jì)思想是基于在葉酸修飾熒光染料探針的合成路線中，添加二胺作為橋基，通過二胺兩端的-NH₂基團(tuán)與熒光染料及葉酸上的-COOH基團(tuán)之間的酰胺反應(yīng)，熒光染料和葉酸上的-COOH基團(tuán)分別與二胺兩端的-NH₂反應(yīng)生成酰胺鍵而相連，實(shí)現(xiàn)熒光染料、二胺及葉酸三者的連接，從而構(gòu)成熒光染料-二胺葉酸結(jié)構(gòu)的熒光染料探針。二胺的加入增長了染料和葉酸之間的C鏈長度，減小甚至避免了熒光染料和葉酸直接相連時所存在的位阻效益，提高了探針分子的合成產(chǎn)率。