[發(fā)明專利]以二胺為橋基的葉酸修飾熒光染料探針的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201210412846.7 | 申請日: | 2012-10-25 |
| 公開(公告)號: | CN102925137A | 公開(公告)日: | 2013-02-13 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人: | 費(fèi)學(xué)寧;曹凌云;郝亞超;谷迎春 | 申請(專利權(quán))人: | 天津城市建設(shè)學(xué)院 |
| 主分類號: | C09K11/06 | 分類號: | C09K11/06;C09B57/00;C09B23/06;C09B23/10 |
| 代理公司: | 天津才智專利商標(biāo)代理有限公司 12108 | 代理人: | 呂志英 |
| 地址: | 300384 *** | 國省代碼: | 天津;12 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 橋基 葉酸 修飾 熒光 染料 探針 方法 | ||
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及化學(xué)及生物科學(xué)交叉領(lǐng)域,特別是一種以二胺為橋基的葉酸修飾熒光染料探針的方法。
背景技術(shù)
熒光分析方法由于具有靈敏度高,選擇性好,所需試樣量小等優(yōu)勢,在分析化學(xué),尤其是在生物分析中被廣泛應(yīng)用。由于大多數(shù)生物分子本身熒光較弱或基本無熒光,檢測靈敏度較差,熒光探針技術(shù)應(yīng)運(yùn)而生。熒光探針技術(shù)指人們用強(qiáng)熒光的標(biāo)記試劑或光生成試劑對待測物進(jìn)行標(biāo)記或衍生,生成具有高熒光強(qiáng)度的共價或非共價結(jié)合的物質(zhì)。
隨著生物技術(shù)的不斷發(fā)展,熒光探針技術(shù)已經(jīng)在核酸、蛋白質(zhì)、細(xì)胞檢測免疫分析等領(lǐng)域得到了重要應(yīng)用,表現(xiàn)出快速、靈敏、高通量和易自動化等特點(diǎn)。尤其近年來發(fā)展起來的熒光化學(xué)傳感器和分子信號系統(tǒng)的應(yīng)用已深入到藥物學(xué)、生理學(xué)、環(huán)境科學(xué)、信息科學(xué)、生命科學(xué)等多個領(lǐng)域。
有機(jī)熒光染料如噻唑橙類(TO)染料、噁唑黃類(YO)染料和吲哚Cy類菁染料是目前常用的核酸標(biāo)記類熒光染料,與現(xiàn)有的熒光標(biāo)記試劑如羅丹明、熒光素等相比更具有優(yōu)越性,主要表現(xiàn)在:(1)具有大的摩爾吸光系數(shù)和高的熒光量子產(chǎn)率,它們大多數(shù)在較低的濃度就可產(chǎn)生較強(qiáng)的熒光,可作為熒光探針與生物分子共價或非共價鏈接,分別形成偶聯(lián)物或復(fù)合物,使這些分子成為能用于細(xì)胞研究的理想熒光基團(tuán);(2)具有相對的光穩(wěn)定性,不會在熒光顯微鏡下迅速猝滅;(3)類型多樣,結(jié)構(gòu)具有多樣性和可變性,通過結(jié)構(gòu)的改變可使其在生理?xiàng)l件下具有不同的水溶解性、穩(wěn)定性、光譜性能等。
葉酸受體(FR)在腫瘤細(xì)胞中都有過度表達(dá),而在正常組織中保守表達(dá),利用葉酸受體(FR)與葉酸(FA)及其類似物高親合力結(jié)合的特性,將葉酸偶聯(lián)的熒光探針輸運(yùn)到腫瘤組織,實(shí)現(xiàn)腫瘤組織的特異性靶向光學(xué)成像,這一熒光探針技術(shù)用于腫瘤細(xì)胞的早期識別是近年來備受關(guān)注的熱點(diǎn)之一。
熒光染料-葉酸這一結(jié)構(gòu)的靶向熒光探針分子因價格昂貴,合成收率低,分離困難,成為制約其發(fā)展的瓶頸問題之一。
發(fā)明內(nèi)容
為解決上述技術(shù)中存在的問題,本發(fā)明的目的提供一種以二胺為橋基的葉酸修飾熒光染料探針的方法,橋基二胺的存在,減小了葉酸修飾的熒光染料探針合成路線中,熒光染料和葉酸之間所存在的空間位阻效應(yīng),提高了熒光染料探針的合成產(chǎn)率。
為實(shí)現(xiàn)上述目的,本發(fā)明采用的技術(shù)方案是提供一種以二胺為橋基的葉酸修飾熒光染料探針的方法,該方法是在葉酸修飾熒光染料探針的合成路線中實(shí)現(xiàn)的,其中:該方法將二胺作為橋基引入,橋基二胺的兩端分別與熒光染料和葉酸連接,構(gòu)成熒光染料-二胺-葉酸結(jié)構(gòu)的熒光探針;所述熒光染料為具有熒光探針特性且?guī)в?COOH基團(tuán)的熒光染料;所述橋基二胺一端連接熒光染料,另一端連接葉酸。它們的連接方式為:通過二胺兩端的-NH2分別與熒光染料及葉酸上的-COOH基團(tuán)之間的酰胺反應(yīng)實(shí)現(xiàn)熒光染料、二胺及葉酸三者的連接。
本發(fā)明的效果為該方法在葉酸修飾熒光染料探針的合成路線中,添加二胺作為橋基,增加熒光染料和葉酸之間的C鏈長度,減小染料分子和葉酸之間的空間位阻效應(yīng)。這一做法可提高葉酸修飾的熒光染料探針合成產(chǎn)率,較未添加二胺橋基的合成路線,可提高5%~10%。
附圖說明
圖1為以二胺為橋基的葉酸修飾熒光染料探針方法的示意圖;
圖中:
1、熒光染料????2、二胺????3、葉酸????4、酰胺反應(yīng)
5、熒光染料-二胺-葉酸結(jié)構(gòu)的熒光探針
圖2以二胺為橋基的葉酸修飾TO類熒光染料探針的合成路線;
圖3以二胺為橋基的葉酸修飾YO類熒光染料探針的合成路線;
圖4以二胺為橋基的葉酸修飾Cy3菁染料熒光染料探針的合成路線;
圖5以二胺為橋基的葉酸修飾咔唑橋基類熒光染料探針的合成路線。
具體實(shí)施方式
結(jié)合附圖對本發(fā)明的二胺為橋基葉酸修飾熒光染料探針的方法的實(shí)現(xiàn)具體過程加以說明。
本發(fā)明的二胺為橋基葉酸修飾熒光染料探針的方法設(shè)計(jì)思想是基于在葉酸修飾熒光染料探針的合成路線中,添加二胺作為橋基,通過二胺兩端的-NH2基團(tuán)與熒光染料及葉酸上的-COOH基團(tuán)之間的酰胺反應(yīng),熒光染料和葉酸上的-COOH基團(tuán)分別與二胺兩端的-NH2反應(yīng)生成酰胺鍵而相連,實(shí)現(xiàn)熒光染料、二胺及葉酸三者的連接,從而構(gòu)成熒光染料-二胺葉酸結(jié)構(gòu)的熒光染料探針。二胺的加入增長了染料和葉酸之間的C鏈長度,減小甚至避免了熒光染料和葉酸直接相連時所存在的位阻效益,提高了探針分子的合成產(chǎn)率。
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