[發明專利]一株綠色木霉及其在黃瓜上的應用

有效

• 申請號: 201210411801.8
• 申請日: 2012-10-24
• 公開（公告）號: CN102925366A
• 公開（公告）日: 2013-02-13
• 發明（設計）人: 牛贍光;王清海;劉幸紅;段春華;戴寶
• 申請（專利權）人: 山東省林業科學研究院
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;A01N63/04;A01P3/00;C12R1/885
• 代理公司: 濟南誠智商標專利事務所有限公司 37105
• 代理人: 韓百翠

技術領域

本發明屬于生物防治植物病害領域。具體而言，本發明涉及一種能夠高效防治黃瓜灰霉病、立枯病、菌核病的綠色木霉及其用途，以及采用該綠色木霉制備的生物防治制劑。

背景技術

黃瓜作為我國最主要的蔬菜品種之一，目前栽培面積已經超過100萬公頃，居世界首位。但隨著黃瓜栽培面積的擴大及栽培方式的多樣化，其菜田生態環境已發生較大變化，使各種病害發生日趨嚴重，病原菌的抗藥性也不斷升級，這已成為制約黃瓜產量提高的主要因素。據報道，我國黃瓜病害達50余種，其中常年發生且造成較大經濟損失的主要病害有灰霉病、立枯病、霜霉病、菌核病、細菌性角斑病、白粉病、黑星病、枯萎病、炭疽病、黃瓜疫病及根結線蟲病等10種，嚴重制約著黃瓜生產。

針對上述黃瓜主要病害，目前防治手段主要靠化學農藥結合優化栽培管理。化學農藥雖然可以防治黃瓜主要病害，但是長期使用容易造成農藥殘留超標與環境污染，進而影響農民經濟效益與群眾身體健康。同時上述化學農藥普遍具有較高抗藥性。生物農藥具有毒性較小、環境友好及不易產生抗藥性等優點，通過研制防治黃瓜主要病害的生物農藥，實現生產過程無公害化，可以在保證較好防治效果同時解決農藥殘留超標及抗藥性等問題，符合未來綠色農業發展的趨勢。

木霉（Trichodrma?spp.）屬于半知菌類的絲孢綱、叢梗孢目、叢梗孢科，是一類廣泛分布于土壤、空氣、枯枝落葉及各種發酵物上的真菌，從植物根圈、葉片及種子、球莖表面均可以分離到。木霉通過產生抗生素、營養競爭、重寄生、細胞壁降解酶以及誘導植物產生抗性等機制，對于多種植物病原菌具有拮抗作用，可抑制多種植物病害，是目前生防菌株中研究最為廣泛的菌株之一。木霉對植物病原菌的生物防治機制是多樣而復雜的，常常是多種機制共同作用的結果，不同的菌株生防機制的側重點不同，其生防作用效果與菌株類型、病原真菌的類型、作物類型和環境條件密切相關。

發明內容

本發明的目的是提供一種用于高效防治黃瓜灰霉病、立枯病、菌核病的新的木霉菌株——綠色木霉WLTR16。本發明的綠色木霉菌株具有生長速度快、產孢量大、作用譜廣及在黃瓜葉片、根際能夠快速大量定殖等特點，因此具有良好的應用前景。

本發明的另一個目的是提供一種采用綠色木霉WLTR16制備的能夠高效防治黃瓜病害的生物防治制劑。

本發明的上述目的是通過以下技術方案實現的：

本發明提供一種綠色木霉（Trichoderma?viride）菌株WLTR16，所述菌株的保藏編號為CGMCC?No.6671。

本發明所提供的綠色木霉菌株WLTR16，是從五蓮縣蘑菇上分離獲得的，已于2012年10月12日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（簡稱CGMCC，地址：北京市朝陽區大屯路，中國科學院微生物研究所），保藏號為CGMCC?No.6671。其具有以下生物學特性：在PDA瓊脂培養基上生長快，30℃黑暗條件下培養3d，菌落直徑80mm。菌落初期白色稀疏，后期形成黃綠色產孢區。反面無色。菌絲聚隔，分枝。分生孢子梗形成松柏式的分枝輪廓，分枝末端的小梗束生、對生、互生或單生，瓶形，4.5-10×2.5-3.5μm。分生孢子橢球形、單個，近無色，聚集時呈淡綠色，壁稍粗糙，3.5-5×3-4μm。該菌株的rRNA基因序列測定結果（ITS-5.8S-ITS2區）如SEQ-1所述。

本發明綠色木霉菌（T.viride）WLTR16（CGMCC?No.6671）的培養方法或繁殖方法包括：

（1）普通培養保存采用PDA培養基，配方為馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂12g，蒸餾水1000mL；

（2）實驗室液體培養采用PDB培養基，配方為馬鈴薯200g，葡萄糖20g，蒸餾水1000mL。

（3）固體培養基配方：固料和無機鹽溶液，按質量比1：1.8的比例配制。其中所述固料由質量比為60：40的玉米芯和麩皮組成；所述無機鹽溶液按質量百分比計，包括3.5%磷酸二氫鉀，0.05%硫酸鎂，0.5%硫酸鈣，4%硫酸銨，氯霉素0.05%，剩余為水。

（4）大量發酵培養配方：同（3）中固體培養基配方

本發明還提供一種用于防治黃瓜主要病害的生物防治制劑，所述生物防治制劑包括所述的綠色木霉WLTR16。

本發明所述的生物防治制劑的制備方法包括以下步驟：

（1）制備所述綠色木霉WLTR16的種子液；

（2）將步驟（1）制備的種子液接種到固體培養基中恒溫培養；