[發明專利]含肽類樹狀分子的陽離子脂質、轉基因載體及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201210411758.5
• 申請日: 2012-10-25
• 公開（公告）號: CN102911252A
• 公開（公告）日: 2013-02-06
• 發明（設計）人: 顧忠偉;聶宇;徐翔暉;程剛;姜倩;岳冬;羅奎
• 申請（專利權）人: 四川大學
• 主分類號: C07K5/037
• 分類號: C07K5/037;C12N15/85
• 代理公司: 成都九鼎天元知識產權代理有限公司 51214
• 代理人: 吳彥峰

1.一種含肽類樹狀分子的陽離子脂質，其結構式（Ⅰ）如下：

式（Ⅰ）

其中，R₁為飽和/不飽和烴基、氨基酸基團；R₂為氨基酸基團、飽和/不飽和烴基或；X、Y、Z為NH、O或S；o、p、q?分別獨立為1?或0；

當R₁為飽和/不飽和烴基時，R₂為氨基酸基團；?R₁為氨基酸基團時，?R₂為飽和/不飽和烴基或。

2.如權利要求1所述的陽離子脂質，其中所述飽和/不飽和烴基優選為烷基、烯基、芳香基，更優選為C₁₀-C₂₀的烷基、C₁₀-C₂₀的烯基、含有芳香基的氨基酸衍生物。

3.如權利要求1或2所述的陽離子脂質，其中所述氨基酸基團優選為賴氨酸、精氨酸或組氨酸基團。

4.如權利要求1-3任一項所述的陽離子脂質，其中R₁為α-氨基酸基團，R₂為C₁₀-C₂₀的烷基、C₁₀-C₂₀的烯基，α-氨基酸基團或；X、Y、Z為NH、O。

5.如權利要求1-4任一項所述的陽離子脂質，其中R₁為賴氨酸、精氨酸和組氨酸基團；R₂為9-十八烯基或。

6.如權利要求1所述的陽離子脂質，其結構為：

；

或。

7.一種制備權利要求1所述的陽離子脂質的方法，其合成路線如下：

；

其中R₁與R₂如權利要求1所定義；

其具體步驟如下：

按比例稱取式1、式2、縮合劑、催化劑和有機堿，在0^oC，氮氣保護條件下，加入溶劑反應；然后在室溫下反應，反應結束后，所得溶液洗滌，干燥，減壓濃縮，以柱層析分離得到式3；

或者合成路線如下：

；

其中R₁與R₂如權利要求1所定義；

其具體步驟如下：

按比例稱取式1、化合物4、縮合劑、催化劑和有機堿，在0^oC，氮氣保護條件下，加入溶劑反應；然后在室溫反應，反應結束后，所得溶液洗滌，干燥，減壓濃縮，以柱層析分離得到化合物5。

8.如權利要求7所述的方法，其中所述縮合劑為1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)?碳酰二亞胺鹽酸鹽（EDC·HCl）；所述催化劑為1-羥基苯并三唑（HBOt）；有機堿為N，N-二異丙基乙胺（DIPEA）；所述溶劑為鹵代烴類溶劑，優選為無水二氯甲烷；式1：式2：縮合劑：催化劑：有機堿的摩爾比為1:1：1～4:1～4：4～10；式1：化合物4：縮合劑：催化劑：有機堿的摩爾比為1:1：1～4:1～4：4～10；所述洗滌為依次用碳酸氫鈉溶液、硫酸氫鈉溶液和氯化鈉水溶液洗滌；所述柱層析采用的洗脫劑為乙酸乙酯：石油醚體積比為1:1的混合溶劑。

9.一種轉基因載體，由權利要求1-6任一項所述的陽離子脂質、膽固醇和高純滅菌水組成；所述陽離子脂質摩爾濃度為1mmol/L～10mmol/L，陽離子脂質與膽固醇的摩爾比為1～10:1。

10.如權利要求9所述的轉基因載體的制備方法，包括如下步驟：在室溫、常壓下將所述陽離子脂質、膽固醇和無水氯仿加入茄形瓶中，當陽離子脂質、膽固醇完全溶解后，蒸出氯仿得到干燥脂質膜，再經真空干燥過夜，去除殘留的氯仿；向此干燥的脂質膜加入高純滅菌水配成所需濃度的溶液，攪拌，探頭超聲，最后用脂質體擠出器制備得到含陽離子脂質的轉基因載體。

11.權利要求1-6任一項陽離子脂質在制備轉基因載體中的應用。