[發(fā)明專利]一種絲素蛋白基一體化骨軟骨雙層支架及其制備與應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210411395.5
• 申請日: 2012-10-24
• 公開（公告）號: CN103028145A
• 公開（公告）日: 2013-04-10
• 發(fā)明（設計）人: 徐國偉;趙洪石;陳隆坤;歐陽宏偉
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: A61L27/40
• 分類號: A61L27/40;A61L27/22;A61L27/32;A61L31/12
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;王兵

1.一種絲素蛋白基一體化骨軟骨雙層支架，其特征在于所述絲素蛋白基一體化骨軟骨雙層支架按如下方法制備：（1）絲素蛋白溶液的制備：以桑蠶蠶絲為原料，經(jīng)脫膠、溶解、透析，獲得截留液a，將截留液a或截留液a的濃縮液過濾或離心，取濾液或上層離心液得到絲素蛋白溶液，并用水將絲素蛋白溶液質(zhì)量濃度調(diào)整至50~100mg/ml；（2）三維絲素蛋白支架的制備：將粒徑為100~500μm的氯化鈉顆粒裝入模具中，再加入步驟（1）制備的絲素蛋白溶液，推壓模具的推壓裝置使氯化鈉顆粒密實并排出氣體，將模具在4~70℃下放置2~50h進行交聯(lián)，然后去除模具，獲得交聯(lián)材料，將交聯(lián)材料用水清洗后冷凍干燥，獲得三維絲素蛋白支架；所述加入模具中氯化鈉與絲素蛋白溶液的體積比為1：0.5~2；所述模具為一端封閉且封閉面帶有透氣孔的筒體，筒體的另一端開口并設有帶活塞的推桿；（3）絲素蛋白基一體化骨軟骨雙層支架的制備：將步驟（2）獲得的三維絲素蛋白支架插入PE發(fā)泡棉中并使三維絲素蛋白支架1/2~3/4高度部分露出PE發(fā)泡棉制成浮漂模具，室溫下將浮漂模具按下述步驟漂浮在溶液上使露出的三維絲素蛋白支架浸泡在相應溶液中進行預鈣化和礦化處理，從而制備雙層支架：①將上述浮漂模具漂浮在氯化鈣乙醇溶液上使露出的三維絲素蛋白支架浸泡5~30min后，再漂浮于無水乙醇中浸泡3~10min；②取出步驟①經(jīng)無水乙醇浸泡的浮漂模具漂浮在磷酸氫二鉀水溶液中使露出的三維絲素蛋白支架浸泡5~30min后，再漂浮于去離子水中浸泡3~10min；③重復步驟①和②1~15次，取最后經(jīng)去離子水浸泡的浮漂模具漂浮于氯化鈣乙醇溶液中浸泡5~30min后用去離子水浸泡3~10min，使露出浮漂模具1/2~3/4高度部分的三維絲素蛋白支架預鈣化；④將步驟③的浮漂模具漂浮于仿生鈣離子緩沖液上并使露出的三維絲素蛋白支架浸泡于仿生鈣離子緩沖液中，在37℃下恒溫培養(yǎng)4~8天進行鈣化，去除漂浮模具，獲得所述絲素蛋白基一體化骨軟骨雙層支架；所述仿生鈣離子緩沖液的質(zhì)量組成為：仿生鈣離子緩沖液以1L計，NaCl為9.642g、NaHCO₃為0.426g、KCl為0.27g、K₂HPO₄.3H₂O為0.2772g、MgCl₂.6H₂O為0.3732g、1M?HCl水溶液?45.6mL、CaCl₂.2H₂O為0.441g、Na₂SO₄.10H₂O為0.0852g、NH₂C(CH₂OH)₃為7.3416g。

2.如權利要求1所述絲素蛋白基一體化骨軟骨雙層支架，其特征在于所述步驟①和步驟③中氯化鈣乙醇溶液的濃度均為0.05~2mol/L。

3.如權利要求1所述絲素蛋白基一體化骨軟骨雙層支架，其特征在于所述步驟②中磷酸氫二鉀溶液的濃度為0.05~2mol/L。

4.如權利要求1所述絲素蛋白基一體化骨軟骨雙層支架，其特征在于步驟（3）所述在將步驟（2）獲得的三維絲素蛋白支架插入PE發(fā)泡棉前，先將三維絲素蛋白支架切成4~10mm的厚度，再用體積濃度75%的乙醇水溶液浸泡6~12h。

5.如權利要求1所述絲素蛋白基一體化骨軟骨雙層支架，其特征在于步驟④所述步驟③的浮漂模具漂浮于仿生鈣離子緩沖液上，在37℃下恒溫培養(yǎng)4~6天進行鈣化。