[發明專利]一種海水纖毛蟲體表纖毛的脫毛方法

有效

• 申請號: 201210411092.3
• 申請日: 2012-10-25
• 公開（公告）號: CN102928274A
• 公開（公告）日: 2013-02-13
• 發明（設計）人: 榮小軍;李彬;王嵐;廖梅杰;張正;王印庚;陳貴平
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院黃海水產研究所
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

技術領域

本發明屬于動物學分類領域，具體地涉及一種海水纖毛蟲體表纖毛的脫毛方法。

背景技術

海水纖毛蟲病是海水養殖的重要疾病，能夠引起魚類、對蝦和海參等多種經濟海產動物發病，一些海水盾纖毛蟲的大量寄生可以導致養殖動物的死亡。海水纖毛蟲病的病原學和防治技術研究成為目前研究的熱點。

對纖毛蟲進行準確的分類是開展其生活史研究和疾病防控的基礎。寄生性纖毛蟲往往由于適應性特化，通常兩側高度扁平，體表纖毛密集而無分化，口器通常位于蟲體一側，其結構銀染后難以觀察和區分，為形態分類學研究造成了很大困難（龍紅岸，2008）。

在本發明形成之前，未檢索到海水纖毛蟲體表纖毛的脫毛方法與技術的詳細報道。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種海水纖毛蟲體表纖毛的脫除方法，從而解決其口器觀察難，形態分類學研究存在很大困難的技術問題。

本發明所采用的技術方案是：

一種海水纖毛蟲體表纖毛的脫除方法，具體步驟如下：

a.將獲得的海水纖毛蟲置于重量比30‰的氯化鈉(NaCl)溶液中，然后加入同體積的16%（體積比）乙醇溶液，使溶液中乙醇濃度為8%（體積比），用玻璃棒攪拌均勻后靜置1~2分鐘；

b.加入同體積的15‰（重量比）的氯化鈉溶液，使溶液中乙醇的濃度為4%，用玻璃棒攪拌均勻后靜置1~2分鐘；

c.加入同體積的15‰的氯化鈉(NaCl)溶液，使溶液中乙醇的濃度為2%，用玻璃棒攪拌均勻后即可完成脫毛過程。

本發明與現有技術相比的有益效果：

1、纖毛蟲體體纖毛的脫毛率高，可以達到90%以上，蟲體脫毛干凈徹底，可清晰分辨纖毛蟲的口器特征，并進行準確分類。

2、脫毛的技術流程簡單，成本低廉。

3、該脫毛方法還可以擴展應用于其他淡水纖毛蟲的體纖毛脫毛處理。

附圖說明

圖1脫毛處理前蟲體形態結構（標尺ba?r=10μm）；

圖2脫毛處理后蟲體形態結構正面觀（標尺bar=10μm）；

圖3脫毛處理后蟲體口器形態結構(標尺bar=2μm)：M1小膜1，M2小膜2，M3小膜3,LA唇狀凸起。

具體實施方式

下面以實施例詳細敘述本發明的技術內容，但本發明的保護范圍不受實施例任何形式上的限制。

實施例：

2010年11月，山東膠南某刺參養殖場的刺參發生纖毛蟲病，將患病的刺參放置于加冰的泡沫箱中運回中國水產科學研究院黃海水產研究所（青島）進行蟲體的脫毛處理。

脫毛方法：a.將獲得的海水纖毛蟲置于溶解了0.045克氯化鈉(NaCl)的1500μl蒸餾水溶液中（即質量比為30‰的氯化鈉溶液），然后加入1500μl的16%乙醇溶液，使溶液中乙醇濃度為8%，用玻璃棒攪拌均勻后靜置1~2分鐘；

b.加入3000μl的15‰的氯化鈉溶液，使溶液中乙醇的濃度為4%，用玻璃棒攪拌均勻后靜置1~2分鐘；

c.加入6000μl的15‰的氯化鈉溶液，使溶液中乙醇的濃度為2%，用玻璃棒攪拌均勻后即可完成脫毛過程。

完成脫毛后用Davidson’s?AFA固定液（配方：1000ml固定液含：95%乙醇，330ml；福爾馬林，220ml；冰醋酸，115ml）固定24h后，6000rmp/min離心5分鐘，棄上清，收集底部離心獲得的纖毛蟲用光學顯微鏡或者掃描電鏡觀察脫毛效果和蟲體口器結構。

隨機在電子掃描顯微鏡下觀察50只纖毛蟲蟲體，脫毛個體為48只，脫毛率為96%,脫毛前纖毛蟲體表布滿纖毛，口部結構難以觀察，見圖1，脫毛后蟲體形態結構見圖2，圖2顯示纖毛蟲體表纖毛已經全部脫除。脫毛處理后蟲體口器形態結構見圖3，其中M1為小膜1，M2為小膜2，M3為小膜3,LA為唇狀凸起，從形態分類上該纖毛蟲屬于纖毛動物門(Ciliophora)、寡膜綱(Oligohymenophorea)、盾纖亞綱(Scuticociliatia)、盾纖目(Scuticociliatida)、觸毛亞目(Thigmotrichina)、魚鉤蟲科(Ancistridae?Issel)、后口蟲屬(Boveria?Stevens)的具唇后口蟲Boveria?labialis。

本發明突破了體纖毛密集的海水纖毛蟲口器觀察難的技術瓶頸，對海水纖毛蟲的準確分類、生活史研究和防治藥物研發有重大實用價值。