[發明專利]一種培養皿中篩選煙草抗赤星病種質材料的方法

無效

• 申請號: 201210408757.5
• 申請日: 2012-10-11
• 公開（公告）號: CN102876767A
• 公開（公告）日: 2013-01-16
• 發明（設計）人: 時焦;孫麗萍;孟坤;張峻銓;雒振寧;王鳳龍
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院煙草研究所
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種培養皿中篩選煙草抗赤星病種質材料的方法，其特征在于，按照下列步驟操作：

a、在一種瓊脂培養基上培養煙草赤星病菌；

b、將直徑為5mm的煙草赤星病菌菌餅接種于250ml查彼培養液中，28℃振蕩培養28-30d；

c、紗布過濾除去菌絲體，再經3-5次離心，8000r/分鐘，鏡檢無細胞，獲得毒素粗提液；

d、用生物測定的方法確定毒素的活性；

e、用水將毒素粗提液稀釋2-16(V/V)倍，加入1.8-2.0％(W/V)瓊脂配成含毒素培養基；

f、121℃濕熱滅菌含毒素培養基15-30min；

g、消毒煙草種子；

h、用鑷子將消毒后的煙草種子夾取到含毒素的培養基上，封口膜封口，于25-28℃、12h光照/d培養條件下，培養14d以上；

i、根據煙苗根是否長進培養基中，鑒定出抗煙草赤星病的煙草種質材料。

2.根據權利要求1所述一種培養皿中篩選煙草抗赤星病種質材料的方法，其特征在于，步驟b進一步包括配制查彼培養液：

3.根據權利要求1所述一種培養皿中篩選煙草抗赤星病種質材料的方法，其特征在于，步驟d用生物測定的方法確定毒素的活性，具體為：取6-8葉期的感病品種NC89煙苗，在成熟伸展的葉片背面用注射器的針頭輕輕刺破葉片表皮，用去掉針頭的注射器吸取毒素濾液，然后輕輕將毒素從刺破部分注入煙草葉片，以兩葉脈間約1/3充滿毒素濾液且不溢出葉脈為宜，以培養液和清水同樣處理為對照；處理48h后觀察，以注射部位出現壞死斑為毒素具有活性的標志。

4.根據權利要求1所述一種培養皿中篩選煙草抗赤星病種質材料的方法，其特征在于，步驟g、消毒煙草種子具體為：將80-100粒煙草種子倒入1.5mL離心管中，加入75％(V/V)酒精浸泡30s，用無菌水換洗2次；加入10％(V/V)雙氧水浸泡10min，用無菌水換洗5次。

5.根據權利要求1所述一種培養皿中篩選煙草抗赤星病種質材料的方法，其特征在于，步驟a進一步包括培養赤星病菌的步驟：于一種瓊脂培養基上培養赤星病菌，待赤星病菌長滿培養基后，取直徑5mm的煙草赤星病菌菌餅用于步驟b接種。