[發明專利]食品和飼料中狐貍成分快速檢測試劑盒的制備和檢測方法有效
| 申請號： | 201210408537.2 | 申請日： | 2012-10-14 |
| 公開（公告）號： | CN103088116A | 公開（公告）日： | 2013-05-08 |
| 發明（設計）人： | 孫敏;高宏偉;劉彩霞;龔方 | 申請（專利權）人： | 山東出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;G01N21/64 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 266002 山*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 食品 飼料 狐貍 成分 快速 檢測 試劑盒 制備 方法 | ||
1.一種狐貍成分快速檢測試劑盒，其特征在于其中的試劑包括(1)-(4)：
(1)2×PCR?Master?Mix
包括0.05u/μL?Taq?DNA聚合酶，反應緩沖液，4mmol/L氯化鎂，0.4mmol/L?dNTP(dATP，dCTP，dGTP，dTTP)；
其中反應緩沖液含有20mmol/L?pH8.8的三羥基甲基氨基甲烷-鹽酸、100mmol/L氯化鉀和2％曲拉通X-100；
(2)上游引物：10μmol/L，序列為：5′-TGGAGCATCAGTAGACCTTACAATTT-3′；
(3)下游引物：10μmol/L，序列為：5′-GGCGGGAGGTTTTATATTGATAATAG-3′；
(4)Taqman探針：10μmol/L，序列為：5′-CCCTGCACCTGGCCGGAGTC-3′，其5′端標記FAM報告熒光集團，3′端標記TAMRA淬滅熒光集團。
2.一種使用如權利要求1所述的試劑盒快速檢測狐貍成分的方法，其特征是依次包括下列步驟：
(1)待檢樣品DNA的提取；
(2)狐貍成分的實時熒光PCR擴增：
A.在PCR反應管中加入如權利要求1所述的2×PCR?Master?Mix12.5μtL，上游引物和下游引物各0.5-1μL，Taqman探針0.5-1μL，100ng/μL待測樣品的DNA1-2μL，補充雙蒸水至25μL，混勻；
B.將PCR反應管放入熒光PCR儀，按下述反應條件完成PCR擴增：
94-95℃5min，1個循環，預變性；
94-95℃10-20sec；60℃20-40sec，45個循環，PCR擴增；
(3)應用熒光定量PCR儀隨機軟件，分析擴增結果。
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