[發(fā)明專利]檢測(cè)結(jié)核的表面等離子共振生物傳感器，制備方法及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210407645.8
• 申請(qǐng)日: 2012-10-24
• 公開（公告）號(hào): CN102914520A
• 公開（公告）日: 2013-02-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李根喜;陳紅霞;劉峰;李鵬飛;侯亞菲
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N21/55
• 分類號(hào): G01N21/55
• 代理公司: 上海上大專利事務(wù)所(普通合伙) 31205
• 代理人: 陸聰明

1.一種檢測(cè)結(jié)核的表面等離子共振生物傳感器，為雙通道表面等離子共振儀，其特征在于，免疫芯片的表面修飾有CFP-10的抗體。

2.一種制備根據(jù)權(quán)利要求1所述檢測(cè)結(jié)核的表面等離子共振生物傳感器的方法，其特征在于，該方法的具體步驟為：

a.免疫芯片的處理：將芯片浸沒在水虎魚溶液中，即濃硫酸：過氧化氫的體積比為3:1，反應(yīng)45s，然后用超純水沖洗干凈，氮?dú)獯蹈桑?/p>

b.將處理過的芯片浸沒在0.1mM?的蛋白連接劑中10小時(shí)，蛋白連接劑通過金硫鍵反應(yīng)自組裝到芯片的表面，然后先后用氯仿、甲醇、超純水沖洗，氮?dú)獯蹈桑?/p>

c.將芯片安裝到表面等離子共振儀上，向反應(yīng)池中注入100μL?2.5μg/mL的CFP-10的抗體，它通過與蛋白連接劑的反應(yīng)固定到芯片表面，然后加入100?μL?0.1mg/mL牛血清白蛋白進(jìn)行封板半小時(shí)，這就得到了檢測(cè)結(jié)核的表面等離子共振生物傳感器。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所示的一種制備檢測(cè)結(jié)核的表面等離子共振生物傳感器的方法，其特征在于，所述的CFP-10的抗體以及牛血清白蛋白都是用含有0.15?M?NaCl，10mM，pH為7.4的PBS緩沖液配制。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所示的一種制備檢測(cè)結(jié)核的表面等離子共振生物傳感器的方法，其特征在于，所述蛋白連接劑為Prolinker^TM，用于固定CFP-10的抗體。

5.一種檢測(cè)CFP-10的方法，采用根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)結(jié)核的表面等離子共振生物傳感器，其特征在于，該方法的具體步驟為：

a.向修飾好的芯片上加入待測(cè)溶液：待測(cè)液為內(nèi)含0.15?M?NaCl以及待測(cè)CFP-10的PBS緩沖液，pH?7.4，室溫下反應(yīng)半小時(shí)，然后PBS緩沖液沖洗；

b.向步驟a所得的芯片表面加入氧化鎳納米顆粒與CFP-10的抗體的復(fù)合物，用表面等離子共振儀，實(shí)時(shí)的檢測(cè)反應(yīng)的過程。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種檢測(cè)CFP-10的方法，其特征在于，所述氧化鎳納米顆粒與CFP-10的抗體復(fù)合物制備的具體步驟為：將0.1mg/mL的氧化鎳納米顆粒與2.5μg/mL的CFP-10的抗體等體積混合，搖床上孵育1小時(shí)，然后離心機(jī)離心3次，1200?rpm，20min，每次去除上清，然后加入等量的PBS緩沖液，最終除去上清，加入緩沖液將沉淀溶解，得氧化鎳納米顆粒與CFP-10抗體的復(fù)合物。