[發明專利]一種模擬移動床色譜分離制備24-去氫膽固醇的方法

無效

• 申請號: 201210407032.4
• 申請日: 2012-10-22
• 公開（公告）號: CN102924555A
• 公開（公告）日: 2013-02-13
• 發明（設計）人: 楊亦文;蘇寶根;孔利云;鮑宗必;蘇云;任其龍
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C07J9/00
• 分類號: C07J9/00
• 代理公司: 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224
• 代理人: 胡紅娟

技術領域

本發明涉及藥物的加工提取領域，尤其涉及一種利用模擬移動床色譜分離純化24-去氫膽固醇的方法。

背景技術

24-去氫膽固醇(分子結構如式I)又名3β-羥基-5，24-膽甾二烯、鏈甾醇，為白色或近白色的晶體或粉末，不溶于水，溶于正己烷、石油醚等非極性溶劑，易溶于醇類等極性較大的溶劑。

24-去氫膽固醇和膽固醇的分子結構非常相似，不僅具有膽固醇的一些生理作用，還是重要的醫藥中間體，在作為許多具有生理活性的甾類化合物的合成初始原料上比膽固醇更有優勢，可以廣泛應用于醫藥、化工、生化等領域。例如24-去氫膽固醇在24位多一個雙鍵，在25位上少了一個羥基，將雙鍵打開，增加一個羥基是一個較容易實現的合成反應。因此，24-去氫膽固醇是制備25-羥基維生素D3關鍵中間體25-羥基膽固醇的最佳原料。

24-去氫膽固醇可通過有機反應全合成或半合成得到，也可從動植物中提取分離得到。前者往往因起始物難獲得或反應步驟長，收率低而不具工業價值。后者通常采用溶劑提取技術可以獲得去氫膽固醇粗品，但純度都較低，不符合商業用要求，因此需進一步分離純化。

目前關于24-去氫膽固醇分離純化的報道有傳統的合成轉化法(US?Patent?3846455)、AgNO₃絡合色譜法(US?Patent?3803184)、硅膠柱層析法(Sheu?J?H，Huang?S?Y，Duh?C?Y.J.Nat.Prod.，1996，59(1)：23～26)、高效液相色譜法(Hansbury?E，Scallen?T?J.J.Lipid?Res.，1978，19(4)：742～745)和最近發展的溶劑結晶法(CN101307086)、萃取法(CN101270141)和固定床吸附法(CN101307087)。

其中，合成轉化法采用汞鹽把24-去氫膽固醇轉化成25-羥基膽固醇后再層析或結晶、皂化才能得到較高純度的24-去氫膽固醇，其方法較為繁瑣，且汞離子毒性大，不利于工業生產，還易造成污染。AgNO₃絡合色譜法比較費時費錢，也難以工業化。硅膠柱層析法分離時間長、效率低。HPLC法采用C₁₈反相柱，以乙腈、乙腈-甲醇或甲醇溶液為流動相，可以分離得到24-去氫膽固醇、膽固醇及7-去氫膽固醇等許多甾醇，但它們僅適合分析樣品的制備。溶劑結晶法、萃取法和固定床吸附法具有生產成本低、污染少的特點，適于工業化生產，但經過活性炭吸附或不同溶劑多次結晶得到的24-去氫膽固醇產品純度通常仍低于90％，還含有大量其它結構相近的未知雜質，達不到24-去氫膽固醇產品的高純度要求。

因此，有必要開發可得到高純度的24-去氫膽固醇產品并適用于工業化生產的純化技術。

發明內容

針對現有技術中24-去氫膽固醇產品的分離提純過程中效率低、產品純度低的問題，本發明提供一種自動化程度高、效率高的分離提純24-去氫膽固醇的方法。

一種模擬移動床色譜分離制備24-去氫膽固醇的方法，以羊毛脂中提取得到的24-去氫膽固醇粗品作為原料，以粒徑為5-100μm的十八烷基硅烷鍵合硅膠作為模擬移動床色譜的固定相，以甲醇水溶液作為模擬移動床色譜的流動相。

模擬移動床色譜把一根長的色譜柱分成若干短的色譜柱，各柱之間首尾相連，由進料點(對應進料液流量U_p)、兩個采出點(分別對應提取液流量U_X和提余液流量U_R)以及洗脫液輸入點(對應洗脫液流量U_E)把所有的色譜柱分成了4個區。本發明所述的模擬移動床色譜由4～32根色譜柱組成，色譜柱分四個區域，每區由1～8根相同的色譜柱串聯形成。

T_s為給定的一個切換時間，選擇好進料點、兩個采出點和洗脫液輸入點，在經過了T_s時間后各點分別沿著溶液流動的方向，向下一個柱子推移，這樣循環往復就形成了固定相向相反方向的虛擬流動，從而實現了與真實移動床色譜相近的分離效果。具體包括如下步驟：

(1)將24-去氫膽固醇粗品溶于流動相，配成一定濃度的進樣液，使用模擬移動床色譜系統經兩次分離，分別除去24-去氫膽固醇以外的強、弱吸附雜質組分，得到純化的24-去氫膽固醇溶液；

(2)純化的24-去氫膽固醇的溶液經濃縮、蒸除溶劑后得到純度高的24-去氫膽固醇產品。