[發明專利]牛大力種苗組織培養快速繁殖及育苗的方法

有效

• 申請號: 201210405476.4
• 申請日: 2012-10-09
• 公開（公告）號: CN102893870A
• 公開（公告）日: 2013-01-30
• 發明（設計）人: 馮志祥;張桂琴;黃雪娟
• 申請（專利權）人: 馮志祥
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 玉林市振盛專利商標代理事務所 45109
• 代理人: 邱振泉

技術領域

本發明涉及一種珍稀食用植物油種苗繁育方法，具體地說，涉及一種牛大力種苗快速繁殖及育苗的方法。

背景技術

牛大力屬豆科豆藤屬，直立或披散亞灌木，高1～2米。根系向下直伸，長1米許。幼枝有棱角，披白柔毛。葉互生；3出復葉；托葉2片，三角狀，長約1厘米，具疏茸毛；葉柄長2～3厘米，被長茸毛；小葉矩圓形至卵狀披針形，長4～9厘米，寬2～4厘米，先端略鈍，有時具小銳尖，全緣，基部在葉背邊緣密被茸毛，上面被稀疏的短茸毛，下面密生長茸毛；小托葉2片，線形。花兩性，腋生，短總狀花序稠密；花梗長1～1.5厘米；花苞2裂；萼5裂，披針形，在最下面的1片最長；花冠略長于萼，粉紅色，旗瓣禿凈，圓形，基部白色，外有縱紫紋；翼瓣基部白色，有柄，前端紫色；龍骨瓣2片，基部淺白色，前部互相包著雌雄蕊；雄蕊10，兩體，花藥黃色，圓形；雌蕊1，子房上位。莢果長8～10毫米，徑約5毫米。種子2枚，圓形。花期8～9月。果期10月。生長于深山幽谷之中，氣味甘香，性溫和，具有壯陽，養腎補虛，強筋活絡，平肝、潤肺之功效，主治腎虛，氣虛，腰酸腿痛、風濕病、慢性肝炎、支氣管炎，咳嗽，肺結核等有很好的療效。

發明內容

本發明的目的在于提供一種通過組織培養技術可以脫除多種植物病毒，避免病毒引起的品種退化和減產造成的損失，使原來的優良種性得到保持；繁殖快且量大、成苗快、種苗品質好、移栽成活率高，品種遺傳物質變異小，高產的牛大力的種苗繁殖方法。

本發明人通過選定的牛大力芽苞和葉片作為外植體，經消毒去掉雜質，將芽尖組織和葉片放在分化培養基上進行無菌培育成小植株，將誘導出的小植株切割后接入新的分化培養基中，多次繼代采用分化培養，結果叢生芽數量多，生長快。再轉移到壯苗培養基上培養，形成袋裝苗，經過自然光照下煉苗后出袋栽培，移栽到營養杯中育中苗，成活率達到98％以上。經三年摸索篩選，由于靠本發明人利用了培養基上培養出壯苗，終于找到適合細胞分化，壯苗的培養基作為發明點，從而實現了本發明。

本發明的牛大力繁殖及育苗方法，包括以下技術工藝步驟：一種牛大力種苗組織培養快速繁殖的方法，其特征在于通過采外殖體、無菌分化、快速增殖、壯苗培養，再裝袋育壯苗，采用牛大力莖段、芽苞和葉片作為外植體，消毒，配制分化培養基，壯苗培養基，用定向聚丙烯薄膜袋作為培養皿器，接種，培養，其技術工藝步驟如下：

(1)采外植體，選定牛大力的嫩枝條剪下，連芽和葉片保濕保鮮采集，選取芽苞和嫩葉放清水沖洗，然后用飽和洗衣粉水清洗，再用流動的清水漂洗5～10分鐘。

(2)無菌分化，把漂洗干凈的牛大力芽苞或嫩葉片作為外植體，在無菌接種室工作臺上用72％～75％的酒精消毒10～15秒后，用無菌水沖洗3～8次后置于0.1％～0.2％的升汞中消毒10～30分鐘，再用無菌水漂洗6～10次，后置于10～15％的過氧化氫中消毒10～15分鐘，再用無菌水漂洗4～8次去掉外表雜物。把所消毒的芽苞、葉片放到150倍以上的電子顯微鏡下，用解剖刀切割外表的雜物，清理外表雜物后取下頂尖的芽尖0.2～0.25mm組織，用接種針接種到分化培養基上培養5～20天得到小植株，所述的分化培養基每升含椰子汁50～150ml，蔗糖15～45g，卡拉膠6～10g，肌醇50～150mg，甘氨酸1～3mg，煙酸1～3mg，D-泛酸鈣0.1～0.5mg，吡哆辛鹽酸0.2～3.5mg，生長素0.09～0.25mg，分裂素6BA0.1～0.3mg，烯腺嘌呤0.01～0.03mg，其余為MS培養基中的1/2大量元素和微量元素成分。

(3)快速增殖，培養5～20天后，將誘導出的小植株切割成0.3～0.5mm后接入新的分化培養基中，多次繼代采用分化培養基，在每次轉袋過程中，不斷淘汰白化苗和污染袋苗，剪除枯黃葉片，經5～10次轉袋培養后，得到的小植株再進行壯苗培養，

(4)壯苗培養，將無菌分化增殖獲得的小植株接種到壯苗培養基上培養45～60天得到小苗，所述的壯苗培養基每升含水解酪蛋白1～5g，蔗糖10～35g，卡拉膠6～10g，a-萘乙酸0.2～5.0mg，肌醇20～120mg，鹽酸硫胺5～15mg，甘氨酸1.5～6.0mg，煙酸0.5～5mg，吲哚丁酸0.1～3mg，D-泛酸鈣1～6mg，吡哆辛鹽酸0.4～1.5mg，生長素0.09～0.25mg，蘋果汁10～30g，其余為MS培養基中的1/2大量元素和1/2微量元素成分。