[發明專利]一種制備端粒酶多肽疫苗的方法

有效

• 申請號: 201210403662.4
• 申請日: 2012-10-22
• 公開（公告）號: CN102875657A
• 公開（公告）日: 2013-01-16
• 發明（設計）人: 朱頤申;周云隆;韋萍;歐陽平凱
• 申請（專利權）人: 南京工業大學
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K1/06;C07K1/04;A61K39/00
• 代理公司: 江蘇致邦律師事務所 32230
• 代理人: 徐蓓

1.一種制備端粒酶多肽疫苗GV1001的方法，包括以下步驟:

1)?由Fmoc-L-Lys(Boc)-OH和固相合成樹脂為起始原料，反應得到Fmoc-L-Lys(Boc)-樹脂；

2)?將Fmoc-L-Lys(Boc)-樹脂采用Fmoc固相多肽合成方法按端粒酶多肽疫苗GV1001的多肽序列逐一偶聯得到側鏈基團保護的GV1001-樹脂；

3)?裂解側鏈基團保護的GV1001-樹脂，純化、凍干得到端粒酶多肽疫苗GV1001；

其中：所述固相合成樹脂包括但不限于CTC樹脂、WANG樹脂或HMPA樹脂；所述端粒酶多肽疫苗GV1001的序列為：H-L-Glu-L-Ala-L-Arg-L-Pro-L-Ala-L-Leu-L-Leu-L-Thr-L-Ser-L-Arg-L-Leu-L-Arg-L-Phe-L-Ile-L-Pro-L-Lys-OH。

2.根據權利要求1所述制備端粒酶多肽疫苗GV1001的方法，其特征在于：所述固相合成樹脂的擔載量為0.1?mmol/g-1.6?mmol/g，優選固相合成樹脂的擔載量為0.5?mmol/g-1.0?mmol/g。

3.根據權利要求1所述制備端粒酶多肽疫苗GV1001的方法，其特征在于：所述的步驟1中，Fmoc-L-Lys(Boc)-OH和CTC樹脂在有機堿的作用下，在反應溶劑中生成Fmoc-L-Lys(Boc)-CTC樹脂；所述的有機堿包括TMP、NMM或DIPEA；所述的反應溶劑包括NMP和/或DMF。

4.根據權利要求1所述制備端粒酶多肽疫苗GV1001的方法，其特征在于：所述的步驟1中，Fmoc-L-Lys(Boc)-OH在催化劑和偶聯劑存在下，在反應溶劑中和WANG樹脂或HMPA樹脂生成Fmoc-L-Lys(Boc)-WANG樹脂或Fmoc-L-Lys(Boc)-HMPA樹脂；所述的催化劑為DMAP，所述的偶聯劑包括DCC、DIC、DBC、DCC/HOBt、DIC/HOBt、HATU/HOAt/有機堿、HBTU/HOBt/有機堿、TBTU/HOBt/有機堿或PyBOP/HOBt/有機堿；所述的反應溶劑包括NMP和/或DMF；所述的有機堿包括TMP、NMM或DIPEA。

5.根據權利要求1所述制備端粒酶多肽疫苗GV1001的方法，其特征在于：所述的步驟2中，Fmoc-L-Lys(Boc)-樹脂經過重復的脫保護及與各Fmoc保護氨基酸在反應溶劑中在偶聯劑的作用下偶聯，生成側鏈基團保護的GV1001-樹脂；所述的偶聯劑包括DCC/HOBt、DIC/HOBt、PyBOP/HOBt/有機堿、HBTU/HOBt/有機堿、HATU/HOAt/有機堿或TBTU/HOBt/有機堿；所述的有機堿包括TMP、NMM或DIPEA；所述的反應溶劑包括NMP和/或DMF；所述的Fmoc保護氨基酸依次為：Fmoc-L-Pro-OH、Fmoc-L-Ile-OH、Fmoc-L-Phe-OH、Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-L-Leu-OH、Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-L-Ser(tBu)-OH、Fmoc-L-Thr(tBu)-OH、Fmoc-L-Leu-OH、Fmoc-L-Leu-OH、Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-Pro-OH、Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH。

6.根據權利要求1所述制備端粒酶多肽疫苗GV1001的方法，其特征在于：所述步驟3中，裂解試劑為：TFA/H₂O、TFA/H₂O/TIS、TFA/thioanisole/anisole/EDT或TFA/thioanisole/H₂O/phenol/EDT；優選體積比為90/5/3/2的TFA/thioanisole/anisole/EDT，或體積比為82.5/5/5/5/2.5的TFA/thioanisole/H₂O/phenol/EDT。