[發(fā)明專利]氯霉素化學發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測試劑盒無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201210401796.2 | 申請日： | 2012-10-22 |
| 公開（公告）號： | CN102914653A | 公開（公告）日： | 2013-02-06 |
| 發(fā)明（設計）人： | 張峰;鄭峻峰;呂麗;盧亞楠 | 申請（專利權(quán)）人： | 大連海洋大學;張峰 |
| 主分類號： | G01N33/577 | 分類號： | G01N33/577;G01N21/76 |
| 代理公司： | 大連非凡專利事務所 21220 | 代理人： | 閃紅霞 |
| 地址： | 116000 遼寧*** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 氯霉素 化學 發(fā)光 免疫 檢測 試劑盒 | ||
技術領域
本發(fā)明涉及一種水產(chǎn)品中氯霉素殘留檢測用試劑盒，尤其是一種操作簡單、快捷、成本低廉、靈敏度高的氯霉素化學發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測試劑盒。
背景技術
氯霉素是一種廣譜抗生素，曾經(jīng)被廣泛應用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)。但是，氯霉素存在著嚴重的毒副作用，能引起人的再生障礙性貧血，新生兒、早產(chǎn)兒灰色綜合征等；低濃度的殘留可引起人體內(nèi)細菌的抗藥性，對人體健康存在潛在的威脅。為此，歐盟對進口水產(chǎn)品中氯霉素的殘留量定為0.1μg?/kg，美國FDA對進口水產(chǎn)品中氯霉素的殘留量定為0.3μg?/kg。目前對水產(chǎn)品中氯霉素殘留的檢測方法主要有氣象色譜法（GC）、高效液相色譜法（HPLC）、色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術（LC-MS）、酶聯(lián)免疫檢測（ELISA），氣象色譜法、高效液相色譜法、色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術均能夠滿足檢測需要，但是其設備昂貴、操作復雜。ELISA法具有檢測快捷、成本低廉等優(yōu)點，但是，卻存在著檢測靈敏度低的缺點。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是為了解決現(xiàn)有技術所存在的上述技術問題，提供一種靈敏度高高、檢測快捷、成本低廉的氯霉素化學發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測試劑盒。
本發(fā)明的技術解決方案是：一種氯霉素化學發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，其特征在于包含酶標板及如下試劑：
酶標板：氯霉素與牛血清白蛋白偶聯(lián)物作為抗原包被于96孔酶標板中，包被抗原濃度為5μg/ml；
試劑Ⅰ：氯霉素單克隆抗體，濃度為1:8000；
試劑Ⅱ：辣根過氧化物酶標記兔抗鼠抗體，濃度為1:1000；
試劑Ⅲ：氯霉素標準品，濃度分別為：0ng/ml、0.01ng/ml、0.1ng/ml、1ng/ml、10?ng/ml、20?ng/ml；
試劑Ⅳ：含有體積分數(shù)為0.05%吐溫-20的pH7.4、0.01mol/L的磷酸鹽緩沖液；
試劑Ⅴ：魯米諾溶于0.1mol/L的NaHCO3，形成濃度為0.01mol/L的發(fā)光液A；
試劑Ⅵ：體積分數(shù)30%的H2O2溶于pH8.8的HCl-Tris溶液，形成發(fā)光劑B。
使用本發(fā)明可以將抗體與抗原結(jié)合的高度特異性與酶催化的高效性相結(jié)合，對樣品中氯霉素殘留量進行化學發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測。本發(fā)明分析靈敏度為0.08ng/ml，線性檢測范圍為0.01~20ng/ml，變異系數(shù)2.6~9.5，回收率為87%~114%，與紅霉素、慶大霉素、甲砜霉素、土霉素的交叉反應率小于0.1%，檢測過程需1.0~1.5小時，具有操作簡單、快捷、成本低廉、靈敏度高等優(yōu)點。
附圖說明
圖1是本發(fā)明實施例的標準曲線圖。
具體實施方式
本發(fā)明的氯霉素化學發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測試劑盒包含酶標板及如下試劑：
酶標板：以氯霉素與牛血清白蛋白偶聯(lián)物（購自廣州艾柏金斯生物公司）為抗原包被于96孔聚苯乙烯酶標板上，包被抗原濃度為5μg/ml；是用pH值為9.6的碳酸鹽緩沖液對抗原進行稀釋，按100?mL/孔進行包被，即4℃過夜（12h），次日以pH值為7.4的磷酸鹽洗滌液進行洗滌，拍干，以250?mL/孔含體積分數(shù)2%的BSA封閉液封閉2?h后，用洗液洗滌，干燥后存放于4℃冰箱待包裝測試盒用。
試劑Ⅰ：氯霉素單克隆抗體（購自廣州艾柏金斯生物公司），濃度為1:8000；
試劑Ⅱ：酶標記物，即辣根過氧化物酶標記兔抗鼠抗體（購自上海生工生物公司），濃度為1:1000；
試劑Ⅲ：氯霉素標準品，濃度分別為：0ng/ml、0.01ng/ml、0.1ng/ml、1ng/ml、10?ng/ml、20?ng/ml；
試劑Ⅳ：含有體積分數(shù)為0.05%吐溫-20的pH7.4、0.01mol/L的磷酸鹽緩沖液；
試劑Ⅴ：魯米諾溶于0.1mol/L的NaHCO3，形成濃度為0.01mol/L的發(fā)光液A；
試劑Ⅵ：體積分數(shù)30%的H2O2溶于pH8.8的HCl-Tris溶液，形成發(fā)光劑B。
使用本發(fā)明實施例進行氯霉素化學發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測程序如下：
（1）樣品（水產(chǎn)品）處理
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