[發(fā)明專利]乳糖化肝細胞靶向病毒載體的制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210401034.2
• 申請日: 2012-10-22
• 公開（公告）號: CN102895667A
• 公開（公告）日: 2013-01-30
• 發(fā)明（設計）人: 趙慶歡;劉紅海;樂曉桐;李詠梅;顧莉娟
• 申請（專利權）人: 蘇州百拓生物技術服務有限公司
• 主分類號: A61K47/48
• 分類號: A61K47/48;A61K47/26;A61K45/00;A61P35/00
• 代理公司: 南京蘇科專利代理有限責任公司 32102
• 代理人: 陸明耀;陳忠輝

1.一種乳糖化肝細胞靶向病毒載體的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

步驟一：將輪狀病毒結構蛋白VP2或者VP6的基因構建到蛋白表達質粒pET系列載體上，得到含有輪狀病毒結構蛋白的表達質粒pET-VP2或者pET-VP6；

步驟二：將步驟一得到的含有輪狀病毒結構蛋白的表達質粒pET-VP2或者pET-VP6轉化大腸桿菌，表達出包涵體蛋白IB；

步驟三：所述包涵體蛋白IB經復性和重新折疊后，形成有活性的蛋白R-VP2或者R-VP6；

步驟四：將步驟三得到的蛋白R-VP2或者R-VP6與抗癌藥物進行交聯，形成抗癌藥物與蛋白R-VP2或者R-VP6的共軛物；

步驟五：將步驟四得到抗癌藥物與蛋白R-VP2或者R-VP6的共軛物進行自組裝，形成攜帶有抗癌藥物的病毒樣顆粒；

步驟六：將靶向配體乳糖酸共價交聯到所述攜帶有抗癌藥物的病毒樣顆粒的外表面，得到乳糖化肝細胞靶向病毒載體。

2.根據權利要求1所述的乳糖化肝細胞靶向病毒載體的制備方法，其特征在于：所述步驟五當中，先在pH值為4～9的緩沖液中進行自組裝，溫度為10℃～40℃，時間為3h～16h，自組裝完成后在10000rpm～30000rpm轉速條件下進行離心分離，水洗后得到攜帶有抗癌藥物的病毒樣顆粒。

3.根據權利要求2所述的乳糖化肝細胞靶向病毒載體的制備方法，其特征在于：所述緩沖液為碳酸鈉-碳酸緩沖液，Tris-HCl緩沖液或者PBS緩沖液中的任意一種。

4.根據權利要求1所述的乳糖化肝細胞靶向病毒載體的制備方法，其特征在于：所述抗癌藥物為阿霉素、紫杉醇、喜樹堿或者siRNA中的任意一種。

5.根據權利要求1所述的乳糖化肝細胞靶向病毒載體的制備方法，其特征在于：所述步驟六包括：先將EDC、NHS和乳糖酸混合反應，乳糖酸:EDC:NHS的摩爾比是（1:1:10）～（1:1:5），反應2h～8h后，把β-巰基乙醇加入到反應液中淬滅EDC；然后將攜帶有抗癌藥物的病毒樣顆粒加入到反應液中，繼續(xù)反應12h～20h，最終得到乳糖化肝細胞靶向病毒載體。