[發(fā)明專利]脂肪組織衍生的基質(zhì)干細(xì)胞在治療瘺中的用途

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210400991.3
• 申請日: 2006-05-16
• 公開（公告）號: CN103143055A
• 公開（公告）日: 2013-06-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬里亞赫馬·費(fèi)爾南德茲米格爾;曼努埃爾安赫爾·岡薩雷斯德拉培尼亞;羅薩阿尼婭·加西亞卡斯特羅;馬里亞諾·加西亞阿蘭斯;達(dá)米安·加西亞奧爾莫
• 申請（專利權(quán)）人: 塞勒里克斯有限公司;馬德里自治大學(xué)
• 主分類號: A61L17/08
• 分類號: A61L17/08;A61L24/00;A61L27/38;A61K35/12;A61P1/00;A61P9/14;A61P1/16;A61P15/00;A61P15/02;A61P11/00;A61P13/10;A61P11/02;A61P25/00
• 代理公司: 北京英賽嘉華知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11204
• 代理人: 王達(dá)佐;洪欣

相關(guān)申請參考

本申請是2005年2月25日提交的美國專利申請11/065,461的部分繼續(xù)申請以及2005年2月14日提交的美國專利申請11/056,241的部分繼續(xù)申請，在此將這些申請的內(nèi)容整體通過參考明確并入本文。

發(fā)明背景

一般而言，瘺是正常情況下不連接的器官或脈管之間的異常連接或通道。瘺可以發(fā)生在身體的多個(gè)部位。例如，瘺的種類，以它們在身體中發(fā)生的區(qū)域命名，包括肛門直腸瘺或肛瘺或糞瘺(直腸或其它肛門直腸部位與皮膚表面之間)、動靜脈瘺或A-V瘺(動脈和靜脈之間)、膽瘺(膽管和皮膚表面之間，通常由膽囊手術(shù)造成)、子宮頸瘺(子宮頸中的異常開口)、鼻腦脊液瘺(顱內(nèi)腔和鼻旁竇之間)、腸腸瘺(腸的兩個(gè)部位之間)、腸皮瘺(腸和皮膚表面之間,即從十二指腸或空腸或回腸起)、腸陰道瘺(腸和陰道之間)、胃瘺(胃和皮膚表面之間)、子宮腹膜瘺(子宮和腹膜腔之間)、外淋巴瘺(中耳和內(nèi)耳之間的膜之間的裂口)、肺動靜脈瘺(肺的動脈和靜脈之間,導(dǎo)致血液分流)、直腸陰道瘺(直腸和陰道之間)、臍瘺(臍和腸之間)、氣管食管瘺(呼吸和飼管之間)以及膀胱陰道瘺(膀胱和陰道之間)。瘺的病因包括創(chuàng)傷、內(nèi)科治療的并發(fā)癥和疾病。

瘺的治療隨病因和瘺的程度而變，但是一般涉及外科手術(shù)。多種手術(shù)方法被經(jīng)常使用，最經(jīng)常的是瘺道切開術(shù)、放置泄液線(穿過瘺的通道的繩索用于保持其開放而引流)、或直腸內(nèi)瓣方法(其中健康組織被拉過來置于瘺的內(nèi)側(cè)以使糞便或其它物質(zhì)不會再感染該通道)。對于肛門直腸瘺的手術(shù)并非沒有副作用，包括復(fù)發(fā)、再感染和失禁。

諸如克羅恩病和潰瘍性結(jié)腸炎的炎性腸病為肛門直腸瘺、腸腸瘺、腸皮膚瘺的主要病因。在克羅恩病中所報(bào)道的瘺發(fā)生率為17%至50%。對克羅恩病患者中瘺的治療仍代表了極有挑戰(zhàn)性的問題，因?yàn)楹芏噙@類瘺對可用的療法沒有反應(yīng)。這類瘺以及它們的復(fù)發(fā)是非常讓人痛苦的并發(fā)癥，它們顯著地降低了受累患者的生活質(zhì)量。內(nèi)科療法的最新改進(jìn)(例如用治療)和專業(yè)的手術(shù)處理已經(jīng)減少了對復(fù)雜手術(shù)的需要。然而，許多患者未被治愈。瘺治愈失敗可能是由于受克羅恩病影響的組織的非最佳質(zhì)量。實(shí)際上，克羅恩瘺為一些最壞的可能條件下的傷口愈合提供了模式系統(tǒng)。

瘺的另一主因是諸如由強(qiáng)奸或由分娩期間持續(xù)損傷引起的對陰道和膀胱和/或直腸的創(chuàng)傷，導(dǎo)致直腸陰道瘺和膀胱陰道瘺。在發(fā)展中國家每年大約有100,000婦女在梗阻性分娩期間遭受這類瘺(也稱為產(chǎn)科瘺)。梗阻性分娩期間，嬰兒的頭對母親骨盆的壓力切斷了對該區(qū)域脆弱組織的血液供應(yīng)。死組織脫落，該婦女留下膀胱陰道瘺，有時(shí)還有直腸陰道瘺。這種孔導(dǎo)致永久性的尿和/或糞便失禁。聯(lián)合國人口基金會(UNFPA)估計(jì)產(chǎn)科瘺受害者的全球人數(shù)超過兩百萬。這個(gè)計(jì)算結(jié)果可能是顯著的低估。首次手術(shù)修補(bǔ)的成功率在88%至93%，但隨后的嘗試的成功率會降低。因此，大比例的婦女具有不能通過手術(shù)修復(fù)的產(chǎn)科瘺。

亟需瘺的新療法。

發(fā)明內(nèi)容

除了其它方面以外，本發(fā)明提供新的含有脂肪組織衍生的基質(zhì)干細(xì)胞的組合物。本文描述的含有脂肪組織衍生的基質(zhì)干細(xì)胞的組合物具有獨(dú)特的表型，并表現(xiàn)出比以前描述的脂肪組織衍生的基質(zhì)干細(xì)胞組合物更好的表型同質(zhì)性，因此使得它們比以前描述的組合物更適合用于治療瘺和傷口。含有脂肪組織衍生的基質(zhì)干細(xì)胞的組合物可以與溶液或其它物質(zhì)一起配制，以用作藥物或醫(yī)療用具，例如縫線或粘合劑。此外，還提供采用脂肪組織衍生的基質(zhì)干細(xì)胞治療瘺和傷口的新方法以及用于實(shí)施該方法的試劑盒。

本發(fā)明的這些實(shí)施方案、其它實(shí)施方案以及它們的特點(diǎn)和特征將會由于以下的說明、附圖和權(quán)利要求而顯而易見。

附圖簡要說明

圖1顯示了由實(shí)施例1的方法分離的細(xì)胞通過免疫熒光染色的表征結(jié)果。免疫陽性細(xì)胞的頻率表示如下：-,小于5%；+/-,6-15%；+,16-50%；++,51-85%；以及+++,86-100%。P，傳代次數(shù)。

圖2顯示了脂肪組織衍生的基質(zhì)干細(xì)胞的間接免疫熒光表征。來自患者#001的細(xì)胞在植入no.6后傳代6細(xì)胞。藍(lán)色表示DAPI染色的核。(A)CD90;(B)c-Kit;(C)波形蛋白。

圖3總結(jié)了采用本發(fā)明的一些方法和組合物獲得的臨床結(jié)果。F，女性；M，男性；NI，未植入；NA，未分析。

圖4顯示了脂抽吸物衍生的細(xì)胞在不同F(xiàn)BS濃度(0.5、2.5和10%，如所指明的)時(shí)的生長曲線。人滑液成纖維細(xì)胞在5%或10%FBS存在下培養(yǎng)。以595nm處的吸光度顯示細(xì)胞數(shù)目±SD。數(shù)據(jù)來自三個(gè)重復(fù)孔的有代表性試驗(yàn)。

圖5顯示在靠近縫合的內(nèi)開口處注射細(xì)胞后直腸粘膜中的泡。