[發明專利]位點特異性絲氨酸重組酶和它們的使用方法

有效

• 申請號: 201210400767.4
• 申請日: 2005-02-08
• 公開（公告）號: CN102994492A
• 公開（公告）日: 2013-03-27
• 發明（設計）人: M·帕迪達姆
• 申請（專利權）人: 英特拉克森公司
• 主分類號: C12N15/09
• 分類號: C12N15/09;C12N5/10;C12N15/79;C12N15/54
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司 72002
• 代理人: 林曉紅

1.在真核細胞中獲得位點特異性重組的方法，所述方法包括：提供包含第一重組位點和第二重組位點的分離的真核細胞；將所述第一和第二重組位點與原核重組酶多肽接觸，從而在所述重組位點之間產生重組，其中所述重組酶多肽能夠介導所述第一和第二重組位點之間的重組，所述第一重組位點是噬菌體基因組重組附著位點(attP)或細菌基因組重組附著位點(attB)，所述第二重組位點是attB或attP，所述重組酶選自化膿性鏈球菌（Streptococcus?pyogenes）噬菌體重組酶或枯草芽孢桿菌（Bacillus?subtilis）噬菌體重組酶，條件是當第一重組附著位點是attB時，所述第二重組附著位點是attP；當第一重組附著位點是attP時，第二重組附著位點是attB。

2.在真核細胞中獲得位點特異性重組的方法，所述方法包括：提供包含第一重組位點和第二重組位點的分離的真核細胞；將所述第一和第二重組位點與原核重組酶多肽接觸，從而在所述重組位點之間產生重組，其中所述重組酶多肽能夠介導所述第一和第二重組位點之間的重組，所述第一重組位點是attP或attB，所述第二重組位點是假附著位點，所述重組酶選自化膿性鏈球菌噬菌體重組酶或者枯草芽孢桿菌噬菌體重組酶。

3.權利要求1或2的方法，其中所述重組酶多肽選自SF370.1重組酶或者SPβc2重組酶。

4.權利要求1或2的方法，其中所述重組酶多肽由可操縱性地連接至啟動子的多核苷酸所編碼，所述啟動子介導所述多核苷酸在所述真核細胞中的表達。

5.權利要求1或2的方法，其中，通過編碼所述重組酶多肽的多核苷酸的表達，將所述重組酶多肽導入所述真核細胞中。

6.權利要求1或2的方法，其中所述重組酶多肽作為多肽被導入所述真核細胞中。

7.權利要求1或2的方法，其中，借助編碼所述重組酶多肽的信使RNA，將所述重組酶多肽導入所述真核細胞中。

8.權利要求1或2的方法，其中所述位點特異性重組導致DNA的整合、刪除、倒位、易位或交換。

9.獲得具有穩定整合的多核苷酸序列的真核細胞的方法，所述方法包括：將多核苷酸導入包含第一重組attB或attP位點的真核細胞，其中所述多核苷酸包含核酸序列和第二重組attP或attB位點；將所述第一和所述第二重組位點與原核重組酶多肽接觸，其中所述重組酶多肽能夠介導所述第一重組位點和第二重組位點之間的位點特異性重組，并且所述重組酶選自化膿性鏈球菌噬菌體重組酶或者枯草芽孢桿菌噬菌體重組酶，條件是當所述第一重組位點是attB時，所述第二重組位點是attP；當所述第一重組位點是attP時，所述第二重組位點是attB。

10.獲得具有穩定整合的多核苷酸序列的真核細胞的方法，所述方法包括：將多核苷酸導入包含第一重組假附著位點的真核細胞，其中所述多核苷酸包含核酸序列和第二重組attP或attB位點；將所能夠介導所述第一重組位點和所述第二重組位點之間的位點特異性重組，并且所述重組酶選自化膿性鏈球菌噬菌體重組酶或者枯草芽孢桿菌噬菌體重組酶。

11.權利要求9或10的方法，其中所述重組酶多肽選自SF370.1重組酶或者SPβc2重組酶。

12.權利要求9或10的方法，其中所述編碼重組酶的多核苷酸可操縱性地連接至啟動子，所述啟動子介導所述多核苷酸在所述真核細胞中的表達。

13.權利要求9或10的方法，其中，通過編碼所述重組酶多肽的多核苷酸的表達，將所述重組酶多肽導入所述真核細胞中。

14.權利要求9或10的方法，其中所述重組酶多肽作為多肽被導入所述真核細胞中。

15.權利要求9或10的方法，其中，通過編碼所述重組酶多肽的RNA的表達，將所述重組酶多肽導入所述真核細胞中。