[發(fā)明專利]蛋白質(zhì)微陣列芯片的臨界值一級(jí)參考品的制備方法、臨界值系數(shù)的確定和實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定方法

有效

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• 申請(qǐng)日: 2012-10-18
• 公開（公告）號(hào): CN103777025B
• 公開（公告）日: 2017-07-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 喻長(zhǎng)杰;柳飛舟;姚涌
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海銘源數(shù)康生物芯片有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/96
• 分類號(hào): G01N33/96;G01N33/531
• 代理公司: 上海天翔知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司31224
• 代理人: 呂伴

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明屬于生物芯片技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于聯(lián)合檢測(cè)自身抗體蛋白質(zhì)微陣列芯片的臨界值一級(jí)參考品的制備方法、臨界值系數(shù)的確定方法以及實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定方法。

背景技術(shù)：

隨著人們對(duì)自身免疫性疾病（autoimmune diseases，AID）的研究深入，發(fā)現(xiàn)自身免疫性疾病累及全身各個(gè)系統(tǒng)，種類多達(dá)40余種，自身免病患者中，有很大一部分病人的血清或其它體液中可檢測(cè)到一種或多種高效價(jià)的自身抗體，自身抗體數(shù)量達(dá)到上百種（World J Gastroenterol，2010,16:3616-3629.）。自身抗體檢測(cè)對(duì)AID的輔助診斷、病情評(píng)估、療效監(jiān)測(cè)以及預(yù)后判斷均具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。

蛋白芯片微陣列技術(shù)（Protein Microarray）作為一種高通量、高靈敏度、特異性強(qiáng)、快速便捷的檢測(cè)分析方法，在以自身抗體為特征的自身免疫性疾病的診斷、鑒別與篩查中得到了廣泛應(yīng)用，目前常見(jiàn)的商業(yè)化蛋白質(zhì)微陣列芯片技術(shù)檢測(cè)平臺(tái)有FIDIS（微珠芯片）(Ann Biol Clin(Pairs)2005,63:51-58.），AtheNA（微珠芯片），Luminex和Bio-Rad等公司研發(fā)的自身抗體檢測(cè)系統(tǒng)（Anal Bioanal Chem,2009,393:1407-1416.）。此類芯片能同時(shí)對(duì)多個(gè)樣本多個(gè)指標(biāo)進(jìn)行并行檢測(cè)分析，產(chǎn)品性能與傳統(tǒng)方法相當(dāng)，但自動(dòng)化程度和檢測(cè)速度明顯提高，標(biāo)本用量減少，更加適合臨床常規(guī)自身抗體的檢測(cè)需求。

近來(lái)年蛋白質(zhì)微陣列芯片的多重新技術(shù)發(fā)展迅速，且既可用于實(shí)驗(yàn)室研究又可用于臨床常規(guī)分析，該技術(shù)的敏感度和特異度不斷得到提升（Arhtritis Rheum，2005,52:2645-2655.），蛋白質(zhì)微陣列芯片技術(shù)似乎是未來(lái)自身抗體分析的首選方法。

利用蛋白質(zhì)微陣列芯片技術(shù)檢測(cè)樣本所得測(cè)量值是連續(xù)的數(shù)值，臨界參考值（cut-off）的確定對(duì)檢測(cè)結(jié)果的判斷有密切關(guān)系，也直接影響蛋白質(zhì)微陣列芯片技術(shù)的靈敏度與特異度，因而臨界參考值的研究在蛋白質(zhì)微陣列芯片技術(shù)平臺(tái)中至關(guān)重要。

在自身抗體蛋白質(zhì)微陣列芯片的臨界值（cut-off）研究中，有文獻(xiàn)報(bào)道（Clinical Chemistry,2004,50(2):416-422.），利用Human IgG的濃度-灰度標(biāo)準(zhǔn)曲線，選取各個(gè)自身抗體指標(biāo)的臨界值（cut-off）范圍內(nèi)所有共有的最低灰度值所對(duì)應(yīng)的Human IgG的濃度作為臨界值對(duì)照品的濃度，當(dāng)被測(cè)樣本中自身抗體指標(biāo)的信號(hào)值大于臨界值對(duì)照品信號(hào)值時(shí)，結(jié)果判斷為陽(yáng)性，反之，則結(jié)果判斷為陰性。也有文獻(xiàn)報(bào)道，通過(guò)大量健康人陰性血清檢測(cè)實(shí)驗(yàn)，利用統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)處理方法，計(jì)算出每個(gè)自身抗體指標(biāo)的臨界信號(hào)值（cut-off），在此后的實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，當(dāng)某個(gè)指標(biāo)的檢測(cè)信號(hào)值大于該指標(biāo)的臨界信號(hào)值（cut-off）時(shí)，結(jié)果判斷為陽(yáng)性，反之，則結(jié)果判斷為陰性。在這兩種自身抗體蛋白質(zhì)微陣列芯片的臨界值（cut-off）研究中，前者利用Human IgG的濃度-灰度曲線有替代各個(gè)自身抗體指標(biāo)的濃度-灰度曲線是否合理，是值得商榷的。后者將每次實(shí)驗(yàn)過(guò)程中引入的信號(hào)波動(dòng)忽略不計(jì)，這與在蛋白質(zhì)微陣列芯片化學(xué)發(fā)光法實(shí)驗(yàn)過(guò)程中由于實(shí)驗(yàn)操作不能標(biāo)準(zhǔn)化、人為因素較大而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)信號(hào)波動(dòng)較大的實(shí)事不相符合。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明要解決的問(wèn)題是之一在于針對(duì)目前在利用蛋白質(zhì)微陣列芯片---化學(xué)發(fā)光法技術(shù)聯(lián)合并行檢測(cè)多個(gè)自身抗體的實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷方法的不足，提供一種臨界值一級(jí)參考品的制備方法。

本發(fā)明要解決的問(wèn)題是之二在于提供一種利用上述臨界值一級(jí)參考品確定陽(yáng)性對(duì)照品中各自身抗體指標(biāo)的臨界值系數(shù)的方法。

本發(fā)明要解決的問(wèn)題是之三在于針對(duì)目前在利用蛋白質(zhì)微陣列芯片---化學(xué)發(fā)光法技術(shù)聯(lián)合并行檢測(cè)多個(gè)自身抗體的實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷方法的不足，提供一種科學(xué)合理的實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定方法，有效地消除出每次實(shí)驗(yàn)操作時(shí)引入的信號(hào)偏差對(duì)檢測(cè)結(jié)果判斷的影響，同時(shí)保證了實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定的可靠性、穩(wěn)定性，提高產(chǎn)品的靈敏度和特異度。