[發明專利]天冬氨酸激酶III突變體及其宿主細胞和應用

有效

• 申請號: 201210398902.6
• 申請日: 2012-10-18
• 公開（公告）號: CN103773745B
• 公開（公告）日: 2018-03-23
• 發明（設計）人: 岳國君;孫際賓;鄭平;劉嬌;李慶剛;夏令和;周永生;羅虎;周勇;滿云;盧宗梅;馬延和
• 申請（專利權）人: 中糧生物化學（安徽）股份有限公司;天津工業生物技術研究所
• 主分類號: C12N9/12
• 分類號: C12N9/12;C12N15/54;C12N15/63;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12N5/10;C12P13/08;C12P13/12;C12P13/06;C12Q1/48
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司31266
• 代理人: 崔佳佳,馬莉華

1.一種天冬氨酸激酶，其特征在于，所述天冬氨酸激酶的氨基酸序列在對應于SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的第340位的氨基酸殘基選自Pro、Arg或Val。

2.編碼權利要求1所述天冬氨酸激酶的基因。

3.包含權利要求2所述編碼基因的載體。

4.一種宿主細胞，其特征在于，所述宿主細胞含有權利要求2所述編碼基因。

5.權利要求4所述宿主細胞在生產L-氨基酸中的應用。

6.一種制備L-氨基酸的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

a.培養權利要求4所述的宿主細胞，使之產生L-氨基酸；和

b.從培養液中分離L-氨基酸。

7.權利要求1所述天冬氨酸激酶在生產L-氨基酸中的應用。

8.如權利要求5或7所述的應用，其特征在于，所述的L-氨基酸為L-賴氨酸、L-蘇氨酸、L-甲硫氨酸、L-異亮氨酸或L-纈氨酸。

9.如權利要求6所述的方法，其特征在于，所述的L-氨基酸為L-賴氨酸、L-蘇氨酸、L-甲硫氨酸、L-異亮氨酸或L-纈氨酸。

10.一種制備L-賴氨酸、L-蘇氨酸、L-甲硫氨酸、L-異亮氨酸或L-纈氨酸方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

a.利用權利要求1所述的天冬氨酸激酶，催化從L-天冬氨酸生成L-賴氨酸、L-蘇氨酸、L-甲硫氨酸、L-異亮氨酸或L-纈氨酸過程中的以下反應，進而獲得L-賴氨酸、L-蘇氨酸、L-甲硫氨酸、L-異亮氨酸或L-纈氨酸，

和

b.從以上反應體系中分離L-賴氨酸、L-蘇氨酸、L-甲硫氨酸、L-異亮氨酸或L-纈氨酸。

11.制備權利要求1所述天冬氨酸激酶的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

a.改造SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的編碼序列，使得編碼的氨基酸序列中對應于SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的第340位的氨基酸殘基突變為Pro、Arg或Val；

b.將a得到的編碼序列直接轉染合適的宿主細胞或經載體引入合適的宿主細胞；

c.培養b得到的宿主細胞；

d.從步驟c得到的培養體系中分離所述宿主細胞產生的天冬氨酸激酶；和

e.測定所述天冬氨酸激酶解除賴氨酸反饋抑制的能力。

12.改造野生型天冬氨酸激酶使之解除賴氨酸反饋抑制的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

a.將野生型天冬氨酸激酶的氨基酸序列與SEQ ID NO:2所示氨基酸序列作比對；和

b.改造所述野生型天冬氨酸激酶的編碼序列，使得編碼的氨基酸序列中對應于SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的第340位的氨基酸殘基突變為Pro、Arg或Val；

c.將b得到的編碼序列直接轉染合適的宿主細胞或經載體引入合適的宿主細胞；

d.培養c得到的宿主細胞；

e.從步驟d得到的培養體系中分離所述宿主細胞產生的天冬氨酸激酶；和

f.測定所述天冬氨酸激酶解除賴氨酸反饋抑制的能力。