[發(fā)明專利]一種Aβ-淀粉樣多肽1-42純度的檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210398486.X
• 申請(qǐng)日: 2012-10-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102955014A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-03-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐紅巖;閆鳳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海吉爾多肽有限公司;吉爾生化（上海）有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/88
• 分類號(hào): G01N30/88
• 代理公司: 上海浦東良風(fēng)專利代理有限責(zé)任公司 31113
• 代理人: 張勁風(fēng)

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種Aβ-淀粉樣多肽1-42純度的檢測(cè)方法，特別涉及一種利用反相高效液相色譜法以及不同鍵合填料的色譜柱來(lái)檢測(cè)Aβ-淀粉樣多肽1-42純度的方法。

背景技術(shù)

阿爾茨海默病(Alzheimer'sDisease,AD)是一種發(fā)病率高、危害極大的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，主要臨床癥狀是智力進(jìn)行性減退，特征性病理學(xué)改變是老年斑，神經(jīng)元纖維纏結(jié)，以海馬、皮層區(qū)域?yàn)橹鞯纳窠?jīng)元數(shù)目減少。β-淀粉樣多肽1-42(Amyloidβ1-42?peptide,簡(jiǎn)稱Aβ42)是存在于阿爾茨海默病患者腦組織中的特異病理改變之物,同時(shí)它在AD患者的腦積液及血漿中有所改變。研究表明Aβ-淀粉樣多肽1-42在腦內(nèi)的沉積是阿爾茨海默病的主要原因，因此純品Aβ-淀粉樣多肽1-42對(duì)阿爾茨海默病的病理研究有非常重要的作用。

?目前對(duì)Aβ-淀粉樣多肽1-42的藥理研究也已有多種測(cè)定方法，如酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（ELISA），放射免疫分析法（RIA）或免疫放射分析法（Immunoradiometriassay?IRMA）,Western印跡法（Western?Boltting）免疫沉淀法（Immunoprecipi-tation）和免疫組織化學(xué)法（Immunohistochemical,IHC），各種不同檢測(cè)方法的選擇和應(yīng)用，主要取決于實(shí)驗(yàn)研究的要求和目的。以上所有方法的建立是由于制備出了靈敏度高，特異性強(qiáng)和準(zhǔn)確性好的Aβ-淀粉樣多肽1-42，而對(duì)利用HPLC反相高效液相色譜法制備出來(lái)的Aβ-淀粉樣多肽1-42進(jìn)行純度的檢測(cè)就顯得尤為重要。

?對(duì)利用HPLC反相高效液相色譜法制備出來(lái)的Aβ-淀粉樣多肽1-42的檢測(cè)，目前多數(shù)都是利用TFA體系和以聚苯乙烯-聚乙烯基苯為基質(zhì)的聚合物樹(shù)脂填料（PLRP-S柱）居多，由于PLRP-S柱特殊的不耐壓特點(diǎn)，為此所得到的Aβ-淀粉樣多肽1-42不但色譜峰形不對(duì)稱而且所得到的理論純度與實(shí)際純度差異比較大。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種利用反相高效液相色譜法檢測(cè)Aβ-淀粉樣多肽1-42純度的方法，主要解決現(xiàn)有檢測(cè)方法中以聚苯乙烯-聚乙烯基苯為基質(zhì)的聚合物樹(shù)脂填料不耐壓導(dǎo)致理論純度與實(shí)際純度差異比較大，以及對(duì)色譜柱以及緩沖鹽的選擇局限性的技術(shù)問(wèn)題。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

一種Aβ-淀粉樣多肽1-42純度的檢測(cè)方法，包括如下步驟：

1）??將Aβ-淀粉樣多肽1-42用超純水超聲溶解至完全，用濾膜過(guò)濾，取濾液待用。

2）??利用反相高效液相色譜法，對(duì)濾液進(jìn)行檢測(cè)，其檢測(cè)條件是：

色譜柱：C4硅膠柱，?C8硅膠柱，

流動(dòng)相：A相：甲酸的水溶液；?B相：甲酸的乙腈溶液

?C4柱??時(shí)間（min）????????A?????????????????B

?????????0??????????????????????????90%???????????????10%?

?????????25.00????????????????????40%???????????????60%?

?????????30.00????????????????????90%???????????????10%?

C8柱??時(shí)間（min）????????A?????????????????B

?????????0??????????????????????????85%???????????????15%

?????????25.00????????????????????35%???????????????65%

?????????30.00????????????????????85%???????????????15%

上述%是質(zhì)量百分濃度，流速：1ml/min，波長(zhǎng)：220nm。

更為優(yōu)選的方案是Aβ-淀粉樣多肽1-42與超純水添加比例1-2:1(mg:ml)，進(jìn)一步優(yōu)選為1:1(mg:ml)，Aβ-淀粉樣多肽1-42上樣量通常為0.1-0.2mg。

更為優(yōu)選的方案是：所用C4硅膠柱尺寸為：5um，4.6×250mm（I.D）。

更為優(yōu)選的方案是：所用C8硅膠柱為尺寸：5um，4.6×250mm（I.D）。

更為優(yōu)選的方案是：所用的流動(dòng)相的體系是含體積濃度為0.05-0.1%甲酸水溶液和體積濃度為0.05-0.1%甲酸乙腈溶液。