[發明專利]一種直接檢測乙肝病毒核心抗原的方法及配套便攜裝置

有效

• 申請號: 201210398153.7
• 申請日: 2012-10-19
• 公開（公告）號: CN102914652A
• 公開（公告）日: 2013-02-06
• 發明（設計）人: 徐連江;李升玲;李翠霞
• 申請（專利權）人: 徐連江
• 主分類號: G01N33/576
• 分類號: G01N33/576;G01N33/543
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及醫療技術領域，尤其是一種直接檢測乙肝病毒核心抗原的方法及配套便攜裝置。

背景技術

臨床上，用PCR方法檢測HBV?DNA能夠最準確的反映HBV病毒的復制情況，但因其成本高、操作復雜及實驗環境要求高等諸多因素限制，難以作為常規方法來檢測HBV的感染。從理論上來說，HBcAg的檢出主要差異在HBeAg和HBeAb之間。HBcAg主要出現在HBV感染的早期，它的出現標志著病毒的復制，有較強的傳染性；HBeAb的出現則預示著病情趨向好轉，這時體內的HBeAg逐漸消失，病毒的復制減弱，傳染性減少；HBeAg與HBcAg為病毒復制的中間產物，均為C基因區編碼，它們之間的密切基因位置關系決定了它們有較高的表達符合性，所以我們認為一般情況下可以用HBeAg及HBcAg的檢測代替PCR?HBV?DNA的檢測來反映HBV的復制情況。

由于血清內游離HBcAg的量極少，常規方法不易檢出，通常采用的辦法是將乙肝病毒表面抗體和乙肝病毒核心抗體同時包被到微孔板上，乙肝病毒表面抗體與乙肝病毒氏顆粒表面抗原結合，在裂解劑的作用下乙肝病毒氏顆料殼裂解，暴露出乙肝病毒核心抗原后被微孔板上的乙肝病毒核心抗體所吸附，再使過氧化物酶與染色底物反應，最終達到檢測乙肝病毒核心抗原的目的。這種方法在包被抗體時，通常采用針對HBsAg和HBcAg的免疫球蛋白多抗多被，多抗作為包被抗體，效價低、特異性差，其檢測結果的靈敏度低，操作流程也較長。

隨著現代診斷醫學的發展，ELISA診斷試劑已經從最初的合成肽抗原，發展到了基因工程抗原。合成肽采用化學方法制備，由于工藝的局限，合成數量有限，只能達到數百個氨基酸，而利用基因工程制備的抗原分子量更大，也具有更強的穩定性，因此用基因工程抗原取代合成肽抗原已成為必然的市場和技術選擇。

發明內容

本發明的目的是為了克服上述技術缺點提供一種直接檢測乙肝病毒核心抗原的方法及配套便攜裝置。

本發明解決技術問題采用的技術方案為：包括一種直接檢測乙肝病毒核心抗原的方法、配套使用的便攜檢驗箱，所述檢測方法包括檢驗操作步驟、檢驗試劑和檢驗結果判斷方法，所述便攜檢驗箱體內設有加樣吸管、微孔板、洗板機、微型震蕩器、真空抽氣裝置、酶標板和加熱管。

所述檢驗方法為雙抗體夾心法檢測HBV病毒核心抗原法，用單基因表面抗體MC-抗-HBsAg和單基因核心抗體HBcAg同時包被固相載體。

所述檢驗試劑為，促進劑，工作濃度0.4～400mg/ml的抗-HBsAg，裂解劑，工作濃度1％～9％的NP-40、0.05％～1.5％的巰基乙醇、0.05～1.0M/PH7.5的Tris組成的混合液，標記物，工作濃度為1∶350～1∶1400的HRP-抗-HBcAg。

所述檢驗操作步驟為，微孔板每孔加待檢血清100μl，37℃孵育60min后，加促進劑每孔50μl，微型震蕩器振蕩1min，37℃孵育40min，洗板4次后拍干，再加裂解劑每孔100μl，37℃孵育20min，洗板4次，加顯色劑后，37℃孵育10～15min，比色。

所述便攜檢驗箱內部中空，間隔設有控溫室和震蕩室，所述控溫室內設有加熱管、微孔板支架、微孔板和洗板機，所述震蕩室內設有微型震蕩器、試劑瓶架、試管架和真空抽氣裝置，所述便攜檢驗箱體頂部設有震蕩器定時開關、酶標板和加樣吸管。

所述試管架上設有待檢血清試管，所述試劑瓶架上設有促進劑瓶、裂解劑瓶和顯色劑瓶，所述洗板機上設有洗板機開關。

所述加熱管上設有溫控板和加熱定時開關，所述試管架上設有待檢血清試管，所述試劑瓶架上設有促進劑瓶、裂解劑瓶和標記物瓶，所述洗板機上設有洗板機開關。

所述便攜檢驗箱背側面設有電源開關，所述電源開關與加熱管、洗板機、微型震蕩器、真空抽氣裝置分別形成電氣通路。

本發明所具有的有益效果是：本發明操作簡單、快速，實用性強，便攜性高，與PCR探針檢測HBV-DNA陽性結果符合率為92.3％，與乙型肝炎兩對半檢測HBV陽性結果符合率為94.1％，達到實際臨床檢驗要求，適合基層醫療單位使用，有效滿足HBV快速檢測的臨床需要。

附圖說明

附圖1為本發明配套便攜裝置的俯視示意圖。

附圖2為本發明配套便攜裝置的縱切面示意圖。

具體實施方式

下面結合附圖對本發明做以下詳細說明。