[發明專利]甘蔗褐銹病菌PCR檢測方法

無效

• 申請號: 201210396942.7
• 申請日: 2012-10-18
• 公開（公告）號: CN102876797A
• 公開（公告）日: 2013-01-16
• 發明（設計）人: 闕友雄;許莉萍;羅俊;黃寧;袁照年;郭晉隆;徐景升;陳如凱
• 申請（專利權）人: 福建農林大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/645
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

1.一種甘蔗褐銹病菌的PCR檢測方法，包括基因組DNA的提取、PCR檢測體系建立和PCR擴增產物的檢測，其特征在于：?

（1）PCR檢測體系的建立：?PCR擴增體系為總體積25?μl，內含2.5?μl?10×PCR緩沖液，2.5?μl?25?mmol/L?MgCl₂，0.5?μl?10?mmol/L?dNTP，10?μmol/L?的檢測引物PCR-F和PCR-R各1.0?μl，1.25?U?Taq?DNA?Polymerase，20-30?ng基因組DNA，ddH₂O補足到25?μl；?PCR擴增程序如下：94?℃?4?min；94?℃?1?min，58?℃?45?s，72?℃?1?min，35個循環；72?℃8?min；所述10×PCR緩沖液組成成分為100?mmol/L?pH8.5?Tris-HCl，500?mmol/L?KCl和15?mmol/L?MgCl₂；所述檢測引物如下：??

PCR-F：5'-GAGCATCAAGGAAAGTAGCAATA-3'，

PCR-R：5'-GAAGATGGTTCGAGCCACAATTA-3′；???

（2）PCR擴增產物的檢測：瓊脂糖凝膠電泳檢測的PCR擴增圖譜中，在分子量為483?bp的位置出現DNA條帶，為甘蔗褐銹病菌存在的標志。