[發明專利]一種抗牙齦卟啉單胞菌和具核梭桿菌復合特異性IgY抗體及其制備方法和牙膏

有效

• 申請號: 201210396583.5
• 申請日: 2012-10-18
• 公開（公告）號: CN103007278A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發明（設計）人: 陳健芬;羅鑫龍;孫曉青;張萍
• 申請（專利權）人: 上海美加凈日化有限公司
• 主分類號: A61K39/395
• 分類號: A61K39/395;A61K8/64;A61K8/81;A61K8/86;C07K16/12;A61P1/02;A61Q11/00
• 代理公司: 上海天翔知識產權代理有限公司 31224
• 代理人: 呂伴

技術領域

本發明涉及IgY抗體及其制備方法和該IgY制劑的應用，特別涉及抗牙齦卟啉單胞菌和具核梭桿菌復合特異性IgY制劑及其制備方法，以及用該IgY抗體制備的預防由這兩種菌引起的牙齦炎癥及其口臭的牙膏。?

背景技術

我國牙齦、牙周疾病發病率占人口的70%以上，牙齦卟啉單胞菌（Porphyromonas?gingivalis）是慢性齦緣炎、慢性牙周炎、侵襲性牙周炎等牙周病的主要可疑致病菌，其菌毛能夠與口腔上皮細胞表面的甘油醛-3-磷酸脫氫酶結合，侵入牙齦上皮細胞和牙齦成纖維細胞，逃避免疫清除。牙齦卟啉單胞菌產生二肽酰氨肽酶降解結締組織，促進MMP-2和MMP-1活性增加。牙齦卟啉單胞菌的精氨酸和賴氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶（RgpA、RgpB、Kgp）能水解L-12導致INNγ產生減少。部分牙齦卟啉單細胞毛能夠誘導巨噬細胞表達L-1α、L-1β、L-6、TNF?α導致牙槽骨破壞。在牙周病患者同時伴隨著口臭的發生，其口臭主要有具核梭桿菌引起。目前沒有有效的治療口臭的方法，使用抗菌素類藥物治療口臭有很多弊端。?

對于預防和治療牙周病及其口臭從主要的病因菌牙齦卟啉單胞菌和具核梭桿菌中著手是關鍵所在。?

目前用于預防和治療牙周炎的牙膏一般為含有中草藥成分的牙膏。雖然這類的專利有很多，但均無明確療效。?

現有文獻報道表明臨床上使用特異性IgY抗體預防齲齒和治療嬰幼兒輪狀病毒性腹瀉，預防肺纖維化患者綠膿桿菌感染，減輕幽門螺桿菌引起的胃痛效果顯著，且無副作用和成癮性。?

在我們研究的許多種類的IgY中發現，有的牙周病因菌免疫母雞產生的IgY抗體經實驗證明沒有或沒有明顯的抑制牙周病及其口臭的趨勢和療效。簡單的?說，不是所有的IgY都有明顯的治療作用。?

由于牙周病及其口臭的可疑病因菌有十一種之多，但主要的可疑病因菌包括牙齦卟啉單胞菌、具核梭桿菌、伴放線菌放線桿菌、棲牙密螺旋體、福氏擬桿菌、牙齦二氧化碳噬纖維菌等。在探索制備對應的IgY用于治療牙周病及其口臭的同時，我們推測牙齦卟啉單胞菌、具核梭桿菌、伴放線菌放線桿菌、棲牙密螺旋體、福氏擬桿菌、牙齦二氧化碳噬纖維菌都有可能引起牙周病及其口臭；因為我們事先無法預測在這當中的哪些菌是引起牙周病及其口臭的主要因素，哪些菌是引起牙周病及其口臭是次要因素。?

我們認為必須有合適的抗牙周病及其口臭的試驗來確定哪些菌是引起牙周病及其口臭的主要因素。從而指導制備抗牙周病及其口臭的藥物或衛生產品。?

目前的現有技術沒有相關的提示指導技術人員發現抗牙齦卟啉單胞菌、具核梭桿菌復合IgY是解決治療牙周病及其口臭的關鍵。?

技術人員無法預先在不做抗牙周病及其口臭的實驗的前提下，預先得知牙齦卟啉單胞菌、具核梭桿菌是引起牙周病及其口臭的主要因素。?

技術人員無法預先在不做抗牙周病及其口臭的實驗的前提下，預先得知抗牙齦卟啉單胞菌、具核梭桿菌復合IgY比單獨的抗牙齦卟啉單胞菌IgY、單獨的抗具核梭桿菌IgY的效果更好。?

發明內容

本發明所要解決的技術問題之一在于提供抗牙齦卟啉單胞菌和具核梭桿菌復合特異性IgY制劑。?

本發明所要解決的技術問題之二在于提供上述抗牙齦卟啉單胞菌和具核梭桿菌復合特異性IgY制劑的制備方法。?

本發明所要解決的技術問題之三在于提供含上述抗牙齦卟啉單胞菌和具核梭桿菌復合特異性IgY制劑的用于預防由這兩種菌引起的牙周炎癥及其口臭的牙膏。?

作為本發明第一方面的抗牙齦卟啉單胞菌和具核梭桿菌復合特異性IgY制劑，其特征在于，由10～70重量份的牙齦卟啉單胞菌菌體和菌體碎片與30～90重量份的具核梭桿菌菌體和菌體碎片復合成抗原免疫產蛋母雞而制備。?

作為本發明第二方面的抗牙齦卟啉單胞菌和具核梭桿菌復合特異性IgY制劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：?

A．牙齦卟啉單胞菌和具核梭桿菌培養步驟?

A.1細菌種類：牙齦卟啉單胞菌（Porphyromonas?gingivalis）和具核梭桿菌（Fusobacterium?nucleatum）；?

A.2取牙齦卟啉單胞菌（P.g）ATCC33277菌株和具核梭桿菌（Fn）ATCC10953菌株，分別經BHI-S培養基分離培養和擴增培養的牙齦卟啉單細胞菌、具核梭桿菌，并經鑒定確認為牙齦卟啉單胞菌、具核梭桿菌而得到牙齦卟啉單胞菌菌體和菌體碎片、具核梭桿菌菌體和菌體碎片；?

B．免疫原制備步驟：?