[發(fā)明專利]一種細胞染色試劑盒及其使用方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210392692.X
• 申請日: 2012-10-16
• 公開（公告）號: CN102866052A
• 公開（公告）日: 2013-01-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 朱遠源;陳莉;李鐵軍;吳美華
• 申請（專利權(quán)）人: 百奧邁科生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: G01N1/30
• 分類號: G01N1/30
• 代理公司: 上海申匯專利代理有限公司 31001
• 代理人: 翁若瑩

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種細胞染色試劑盒及其使用方法，尤其是指一種用于宮頸癌早期診斷和鑒別的細胞染色試劑盒及其使用方法。

背景技術(shù)

宮頸癌是影響婦女健康的常見惡性腫瘤之一，其發(fā)病率僅次于乳腺癌而居女性腫瘤的第二位。全世界每年約有50萬新發(fā)宮頸癌病例，亞洲約38萬，中國約15萬例，全世界每年約23萬婦女死于宮頸癌，亞洲約19萬，中國約8萬。這個數(shù)據(jù)顯示宮頸癌已成為中國婦女健康的巨大威脅(Ng?E等，CMAL，2004，170(10)：1545-1549；喬友林，2006，26(12)：1293-1295)。宮頸癌中95％是鱗狀細胞癌(Squmous?Cells?Carcinoma，SCC)，臨床一期的治愈率可達到80～90％，二期時是60～70％，進入三期是40～50％，但發(fā)展到四期只有10％的治愈率。因此對宮頸癌前病變包括宮頸上皮內(nèi)瘤變(Cervical?Intraepithelium?Neoplasia，CIN)的防治和早期診斷宮頸癌是控制其發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后的關(guān)鍵(Huth?WK，J?Natl?ComprCanc?Netw，2010，8：1329-1330)，進一步探索針對宮頸癌早期診斷的特異性檢測方法就顯得尤為重要。

由于宮頸癌常繼發(fā)感染伴有明顯的炎癥反應(yīng)，在H&E染色中癌細胞常淹沒在炎癥細胞中難以辨認，或H&E染色中癌細胞質(zhì)為紅色，核為藍色，而紅細胞常為紅色，炎癥細胞為藍色，使尋找癌細胞較為困難，容易漏診。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種細胞染色試劑盒及其使用方法，以增強細胞對染色試劑的親和性，提高染色效率和細胞的辨別率，提高宮頸癌診斷的準確率。

為了達到上述目的，本發(fā)明提供了一種細胞染色試劑盒，其特征在于，包含無花果葉提取液、堿性染料、酸性染料和細胞核染色試劑。

優(yōu)選地，所述的堿性染料為新品紅染色液。

優(yōu)選地，所述的酸性染料為亮綠染色液。

優(yōu)選地，所述的細胞核染色試劑為Harris蘇木素染色劑。

本發(fā)明還提供了上述細胞染色試劑盒的使用方法，其特征在于，依次包括如下步驟：

第一步：將細胞樣本用固定劑固定后，用去離子水洗滌；

第二步：用細胞核染色試劑對第一步所得的細胞樣本的細胞核進行染色，用自來水沖洗后，再用去離子水洗滌；

第三步：用無花果葉提取液孵育第二步所得的細胞樣本，用去離子水洗滌；

第四步：用堿性染料孵育第三步所得的細胞樣本，用去離子水洗滌；

第五步：用酸性染料孵育第四步所得的細胞樣本，用去離子水洗滌；

第六步：將第五步所得的細胞樣本干燥后，封片觀察。

優(yōu)選地，所述的第一步的具體步驟為：將細胞樣本于質(zhì)量濃度為10％的三氯乙酸溶液中固定60min，用去離子水洗滌10sec。

更優(yōu)選地，所述的細胞樣本是細胞涂片或組織切片。其中細胞涂片可以是細胞手工涂片或液基膜式薄層細胞學(xué)涂片，組織切片可以是冰凍切片或石蠟切片。

優(yōu)選地，所述的第二步的具體步驟為：用Harris蘇木素對第一步所得的細胞樣本的細胞核進行染色9min，用自來水沖洗1min后，用去離子水洗30sec，再浸入去離子水10sec。

優(yōu)選地，所述的第三步的具體步驟為：用無花果葉提取液孵育第二步所得的細胞樣本3min，用去離子水洗1min，再浸入去離子水10sec。

優(yōu)選地，所述的第四步的具體步驟為：用新品紅染色液孵育第三步所得的細胞樣本1min，用去離子水洗1min，再浸入去離子水10sec。

優(yōu)選地，所述的第五步的具體步驟為：用亮綠染色液孵育第四步所得的細胞樣本1min，用去離子水洗30sec，再浸入去離子水10sec。

優(yōu)選地，所述的第六步的具體步驟為：將第五步所得的細胞樣本晾干，用中性樹膠封片。

本發(fā)明首次使用無花果葉提取物用于宮頸癌早期診斷，以增強細胞對染色試劑的親和性，提高染色效率和細胞的辨別率，提高宮頸癌診斷的準確率。

本發(fā)明可以對細胞在保持形態(tài)的基礎(chǔ)上增加了不同顏色鑒別，該項技術(shù)具有顏色區(qū)別和細胞形態(tài)分析的雙重功能。

本發(fā)明染色的反應(yīng)速度快，操作步驟簡單，耗時短，同時能滿足篩選非典型細胞所需的技術(shù)要求，為宮頸癌早期診斷和鑒別診斷提供了有效的工具。

附圖說明

圖1是本發(fā)明方法染色的正常/萎縮或化生的上皮細胞和子宮頸管上皮細胞顯微照片。