[發明專利]酶聯免疫分析法直接標記抗原檢測丙型肝炎病毒抗原抗體及檢測試劑盒

無效

• 申請號: 201210391183.5
• 申請日: 2012-10-16
• 公開（公告）號: CN102955032A
• 公開（公告）日: 2013-03-06
• 發明（設計）人: 顧競飛;張年
• 申請（專利權）人: 武漢康苑生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.?“酶聯免疫分析法直接標記抗原檢測丙型肝炎病毒抗原抗體”，其特征在于如下檢測原理:本發明采用時間酶聯免疫分析法，聯合檢測丙型肝炎病毒抗原抗體；該發明建立雙抗夾心的基礎之上，在這里，樣品中的抗原抗體首先被包被于微孔板上的抗丙型肝炎病毒抗原單克隆抗體AbI、丙型肝炎病毒重組抗原AgI捕獲；

在洗掉樣品的其它部分，再加入HRP標記物（HRP標記抗丙型肝炎病毒抗原單克隆抗體AbII、丙型肝炎病毒重組抗原AgII），就可以形成單克隆抗體AbI-丙型肝炎病毒抗原-單克隆抗體AbII?HRP標記物復合物與重組抗原AgI-丙型肝炎病毒抗體-重組抗原AgII??HRP標記物復合物，洗板加入顯色液A、顯色液B以及加入終止液后，用酶聯免疫分析儀測量吸光值，吸光值與樣本中抗原抗體總濃度呈正相關，與臨界值相比較，從而判斷陰陽性。

2.?酶聯免疫分析法直接標記抗原檢測丙型肝炎病毒抗原抗體檢測試劑盒，其特征在于包括盒體，設在盒體內的包被板和設在盒體內試劑及不干膠封片和使用說明書。

3.?根據權利要求2所述包被板，其特征在于包被板上包被的是抗丙型肝炎病毒抗原單克隆抗體與丙型肝炎病毒重組抗原，制備工藝是將包被抗體用包被緩沖液稀釋作為包被液，包被反應板，并用封閉液封閉。

4.?根據權利要求3所述包被緩沖液，其特征在包括Tris-HCl緩沖液、碳酸鹽緩沖液、磷酸鹽緩沖液。

5.?根據權利要求2所述設在盒體內試劑，其特征在于所述試劑包括:?HRP標記物（HRP標記抗丙型肝炎病毒抗原單克隆抗體AbII、丙型肝炎病毒重組抗原AgII）、HCV抗原抗體陰性對照品、HCV抗原抗體陽性對照品、顯色液A、顯色液B、終止液、濃縮洗滌液。

6.?根據權利要求5所述HRP標記物，其特征在于制備方法為:取5mg?HRP溶于1.?0ml?NaHCO₃溶液，充分溶解HRP；加入適量0.?06M?NaIO₄;室溫避光攪拌30分鐘；移入透析袋，用0.?01M,?pH9.?6碳酸鹽緩沖液透析過夜；取純化標記原料(抗丙型肝炎病毒抗原單克隆抗體AbII、丙型肝炎病毒重組抗原AgII按照質量比為1:1混合)?5mg，用0.01lM的NaHCO₃，溶液充分溶解，與酶液混合，裝入透析袋，用0.?01M,?pH9.?6碳酸鹽緩沖液4℃避光透析24小時，換液4次；取透析后結合液，加入0.2ml?0.?4%NaBH₄攪拌30分鐘后，4℃放置4小時；將透析液上Sephadex?G-200層析柱，用0.01M,?PH7.?2的PBS洗脫，收集第一個的洗脫峰，?-20℃保存備用。