[發(fā)明專利]從生物樣本提取核酸的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210389988.6
• 申請日: 2012-10-15
• 公開（公告）號: CN103725670A
• 公開（公告）日: 2014-04-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 郭晶;章文蔚;肖亮;李子華
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳華大基因科技有限公司;深圳華大基因研究院
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京清亦華知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11201
• 代理人: 李志東

1.一種從生物樣本提取核酸的方法，其特征在于，包括以下步驟：

裂解所述生物樣本，以便得到含有核酸的裂解產(chǎn)物；以及

從所述裂解產(chǎn)物中分離所述核酸，

其中，裂解所述生物樣本進一步包括：

利用含有溶菌酶、蝸牛酶和溶壁酶的混合物，對所述生物樣本進行消化；

將消化產(chǎn)物離心，收集沉淀；以及

利用裂解液，對所述沉淀進行裂解，以便得到所述含有核酸的裂解產(chǎn)物。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述溶菌酶、蝸牛酶和溶壁酶的質(zhì)量比為1：1：1。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述裂解液含有200mmol/L?NaCl，100mmol/L?Tris-HCl，pH?8.0，2.0%SDS，50mmol/L?EDTA，0.5%Triton?X-100，

任選地，所述裂解液中進一步含有蛋白酶K，

任選地，所述裂解是在50～55攝氏度下進行的。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，從所述裂解產(chǎn)物中分離核酸進一步包括：

對所述裂解產(chǎn)物進行離心，收集第一上清液；

將含有酚、氯仿和異戊醇的混合物與所述第一上清液按照等體積混合，進行離心后，收集第二上清液，其中，所述含有酚、氯仿和異戊醇的混合物中酚、氯仿和異戊醇的體積比為25：24：1；

將含有氯仿和異戊醇的混合物與所述第二上清液按照等體積混合，進行離心后，收集第三上清液；以及

將含有異丙醇和醋酸鈉的混合物與所述第三上清液按照0.7：1的體積比混合，進行離心后，收集核酸沉淀。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物樣本是通過下列步驟從流體中收集的微生物樣本：

在壓力差的作用下，使含有微生物的流體通過濾膜，

其中，

所述濾膜進樣側(cè)的壓力高于所述濾膜出樣側(cè)的壓力，

所述濾膜的孔徑使得所述微生物被截留在所述濾膜上，

任選地，所述流體為氣體，

任選地，所述氣體為空氣，

任選地，所述壓力差是通過所述出樣側(cè)空氣的定向流動形成的，優(yōu)選，所述壓力差為1000Pa<H≤3000Pa，

任選地，所述微生物為選自細菌、真菌、病毒和放線菌的至少之一。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述濾膜的孔徑為0.1～10微米。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述濾膜為選自尼龍膜濾膜、聚脂核孔膜、聚丙烯膜、尼龍膜、聚偏二氟乙烯膜和醋酸纖維膜的至少之一。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述濾膜為醋酸纖維膜。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述醋酸纖維膜的孔徑為0.22微米。