[發(fā)明專利]單劑量豬肺炎支原體疫苗

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210389058.0
• 申請(qǐng)日: 2002-06-07
• 公開（公告）號(hào): CN102872456A
• 公開（公告）日: 2013-01-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: R·L·凱赫;L·G·薩巴迪尼
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 輝瑞產(chǎn)品公司
• 主分類號(hào): A61K39/00
• 分類號(hào): A61K39/00;A61K39/116;A61K39/295;A61P31/00
• 代理公司: 中國(guó)國(guó)際貿(mào)易促進(jìn)委員會(huì)專利商標(biāo)事務(wù)所 11038
• 代理人: 羅菊華

發(fā)明領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種通過對(duì)約3至10日齡動(dòng)物施以單劑有效量豬肺炎支原體（Mycoplasma?hyopneumoniae）（M.hyo）疫苗來治療或預(yù)防由豬肺炎支原體感染所致動(dòng)物疾病或病癥的方法。所述豬肺炎支原體疫苗可以是完全或部分滅活細(xì)胞或改良活體制劑、亞單位疫苗、或核酸或DNA疫苗。根據(jù)本發(fā)明施用的豬肺炎支原體疫苗可用合成或重組方法制備。

發(fā)明背景

豬肺炎支原體（M.hyo）是一種能引發(fā)豬地方性動(dòng)物肺炎的細(xì)菌病原體。地方性動(dòng)物肺炎是導(dǎo)致下列癥狀的慢性疾病：食物轉(zhuǎn)化不良、發(fā)育障礙及繼發(fā)性肺部感染易感性。豬肺炎支原體很容易通過呼吸道分泌物以及通過母豬-豬仔傳遞而進(jìn)行傳播，并在豬場(chǎng)中大規(guī)模流行。美國(guó)約有99%的豬群被感染，養(yǎng)豬業(yè)每年因此耗費(fèi)約3億美元。

已知的抵御豬肺炎支原體的疫苗大多數(shù)都是基于含佐劑的豬肺炎支原體全細(xì)胞滅活制劑。此外，基于免疫原性多肽或蛋白質(zhì)的疫苗可以通過豬肺炎支原體基因的克隆和重組表達(dá)的方法進(jìn)行合成或制備。能夠在體內(nèi)表達(dá)所述多肽或蛋白質(zhì)的豬肺炎支原體基因也可用作疫苗。

全細(xì)胞滅活豬肺炎支原體疫苗的例子包括RESPISURE和STELLAMUNE，其均可從美國(guó)輝瑞公司獲得。

另外，一些重組制備的可用作亞單位疫苗的豬肺炎支原體免疫原性多肽和蛋白質(zhì)在本領(lǐng)域中已有描述。公開號(hào)為WO96/28472的國(guó)際專利申請(qǐng)中描述了6種豬肺炎支原體蛋白抗原，其分子量分別為46-48、52-54、60-64、72-75、90-94和110-114kDa，而且公開了分子量為52-54、60-64和72-75kDa的抗原的部分蛋白質(zhì)序列以及分子量為46-48kDa的抗原的全長(zhǎng)核苷酸序列和氨基酸序列。

編碼豬肺炎支原體蛋白質(zhì)P46的基因，即p46，也已經(jīng)被Futo等人克隆（1995;J.Bacteriol?177:1915-1917）。該小組的研究表明體外表達(dá)的基因產(chǎn)物可用于診斷豬肺炎支原體感染的抗體免疫應(yīng)答而不與其他種類的支原體發(fā)生交叉反應(yīng)（Futo等,1995;J.Clin.Microbiol.33:680-683）。Futo等人描述的p46基因的序列和診斷用途進(jìn)一步公開于歐洲專利0475185A1。

Wise和Kim（1987,J.Bacteriol.,169:5546-5555）報(bào)道了名為p70、p65（P65，同上）、p50和p44的4種豬肺炎支原體膜整合蛋白質(zhì)，后3種經(jīng)共價(jià)脂連接而被修飾，可誘導(dǎo)強(qiáng)的體液免疫應(yīng)答。對(duì)該免疫應(yīng)答的保護(hù)效果未做研究。編碼P65蛋白質(zhì)的基因也已克隆，其序列和在疫苗及診斷中的用途已描述于美國(guó)專利5,788,962。

國(guó)際專利申請(qǐng)WO91/15593公開了豬肺炎支原體的5種蛋白質(zhì)，其表觀分子量分別為150、90、85、70和43kDa。其中提供了編碼85kDa蛋白質(zhì)（蛋白質(zhì)C）的編碼基因的全長(zhǎng)序列，以及編碼其他4種蛋白質(zhì)的部分核苷酸序列。

Faulds的美國(guó)專利US5,252,328公開了免疫反應(yīng)性豬肺炎支原體蛋白質(zhì)的氨基末端序列，其分子量為36、41、44、48、64、68、74.5、79、88.5、96和121kDa。其他根據(jù)電泳遷移率鑒定的而未公開蛋白質(zhì)序列的蛋白質(zhì)的表觀分子量為22.5、34和52kDa。盡管US?5,252,328提及這些蛋白質(zhì)可用于疫苗制劑，但未報(bào)道任何疫苗實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

國(guó)際專利申請(qǐng)WO?95/09870公開了純化豬肺炎支原體粘附素的生化方法，所述粘附素是支原體的膜整合蛋白，負(fù)責(zé)粘附到宿主的上呼吸道上皮細(xì)胞的纖毛上。WO?95/09870也建議了這些蛋白質(zhì)的測(cè)試方法及用途，例如在疫苗和診斷方面的用途。

King等人的研究論文（1997;Vaccine?15:25-35）公開的分子量為124kDa的粘附素Mhp1是P97的一個(gè)菌株變體。

Wilton等人（1998，Microbiology?144:1931-1943）測(cè)定出了P97的一種94kDa變體。此外，研究表明p97基因是還編碼名為P102的第二種蛋白質(zhì)的操縱子的一部分，該第二種蛋白質(zhì)的推測(cè)分子量約102kDa（Hsu等,1998,Gene?214:13-23）。Minion和Hsu在國(guó)際專利申請(qǐng)WO?99/26664中提出P102可用于疫苗，但未報(bào)道疫苗實(shí)驗(yàn)。