[發(fā)明專利]促進普通小球藻生長的培養(yǎng)基及用其培養(yǎng)小球藻的培養(yǎng)方法

無效

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• 申請日: 2012-10-12
• 公開（公告）號: CN102943045A
• 公開（公告）日: 2013-02-27
• 發(fā)明（設計）人: 陳愛美;施慶珊;馮勁;林萬泉;黃小茉;歐陽友生;陳儀本
• 申請（專利權）人: 廣東省微生物研究所
• 主分類號: C12N1/12
• 分類號: C12N1/12;C12N1/38;C12R1/89
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星

技術領域：

本發(fā)明屬于生物技術領域，具體涉及一種促進普通小球藻生長的培養(yǎng)基及用其培養(yǎng)小球藻的培養(yǎng)方法。

背景技術：

小球藻（Chlorella）作為一種重要的微藻資源，具有極其豐富的營養(yǎng)成分和優(yōu)良的醫(yī)療保健作用。其蛋白質(zhì)含量50%-67%，其中含有人體所必需的20種氨基酸、多種維生素和微量元素，以及亞麻酸、亞油酸、胡蘿卜素等成分。其中二十碳五烯酸（EPA）和二十二碳六烯酸（DHA），醫(yī)學臨床已經(jīng)證明這兩種成分具有多種重要的生理功能。其次，小球藻含有的多糖和蛋白質(zhì)具有顯著的抗瘤抗癌、增強免疫及抗病毒感染的活性。在水產(chǎn)養(yǎng)殖上，單細胞的小球藻可直接作為草食性魚類和魚苗的餌料，或者作為肉食性魚類仔魚開口期食用的豐年蟲等動物的餌料。此外，小球藻在其生長時能消耗掉污水水體中的部分氮、磷，從而達到改善水質(zhì)的目的，具有很高的經(jīng)濟價值。

目前，小球藻的培養(yǎng)方式可分為自養(yǎng)培養(yǎng)和異養(yǎng)培養(yǎng)。小球藻的自養(yǎng)培養(yǎng)既可利用自然光，也可利用人工光照，培養(yǎng)基主要由無機化合物組成，最適pH為6.5-7.5，最適光照強度為36-90μmol/(m²·s)，溫度為20-30℃。目前，關于小球藻的自養(yǎng)培養(yǎng)技術已經(jīng)成熟，但是隨著細胞的不斷增殖，進入培養(yǎng)物的光照被阻擋，導致光合作用減弱，從而限制了其生物量的進一步提高。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明的第一目的是提供一種促進普通小球藻生長的培養(yǎng)基。

本發(fā)明的促進普通小球藻生長的培養(yǎng)基，其特征在于，在常規(guī)的OECD培養(yǎng)液中加入可溶性稀土化合物，稀土離子終濃度為10^-6~10^-2mM。

所述的稀土化合物優(yōu)選為硝酸鈰或氯化鈰。

本發(fā)明的第二個目的是提供一種促進普通小球藻生長的培養(yǎng)方法，其特征在于，以上述促進普通小球藻生長的培養(yǎng)基對小球藻進行培養(yǎng)。

優(yōu)選，所述的培養(yǎng)方法具體為：將小球藻細胞接種到促進普通小球藻生長的培養(yǎng)基中，初始接種量為10⁵~10⁶cells/mL，在溫度23~28℃，光照強度2200~2800lux，光暗比12h：12h，進行培養(yǎng)。

本發(fā)明通過在OECD藻類培養(yǎng)液中加入可溶性稀土化合物，如硝酸鈰或氯化鈰，用其培養(yǎng)普通小球藻，所培養(yǎng)的普通小球藻細胞到達穩(wěn)定期時，每升培養(yǎng)液可獲得細胞干物質(zhì)43~59mg，比未添加稀土化合物的OECD藻類培養(yǎng)液提高34~69%，有效的提高了小球藻的產(chǎn)量，具有廣闊的應用前景。

附圖說明：

圖1是用本發(fā)明的促進普通小球藻生長的培養(yǎng)基對普通小球藻進行培養(yǎng)后的生長曲線圖。

具體實施方式：

以下實施例是對本發(fā)明的進一步說明，而不是對本發(fā)明的限制。

本發(fā)明的促進普通小球藻生長的培養(yǎng)方法的具體步驟如下：

配制OECD培養(yǎng)液：

表1：OECD培養(yǎng)液的配方

（1）按照儲備液1的配方，取各化合物溶于去離子水中，121℃，15min滅菌，得到儲備液1。按照儲備液2的配方，取各化合物溶于去離子水中，0.22μm濾膜過濾除菌，得到儲備液2。按照儲備液3的配方，取各化合物溶于去離子水中，121℃，15min滅菌，得到儲備液3。按照儲備液4的配方，取各化合物溶于去離子水中，0.22μm濾膜過濾除菌，得到儲備液4。再取儲備液110mL、儲備液21mL、儲備液31mL和儲備液41mL，混合后，用去離子水定容至1L，得到OECD培養(yǎng)液，該OECD培養(yǎng)液為藻類常規(guī)培養(yǎng)液。

（2）添加稀土化合物：將稀土化合物加入到步驟（1）獲得的OECD培養(yǎng)液中，使稀土離子的終濃度為10^-6~10^-2mM，得到促進普通小球藻生長的培養(yǎng)基。

（3）步驟（2）所述的稀土化合物可選擇硝酸鈰或氯化鈰。

（4）接種細胞：無菌條件下，將活化的普通小球藻細胞接種至含有步驟（2）獲得的促進普通小球藻生長的培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，使細胞初始濃度為10⁵~10⁶cells/mL。

（5）培養(yǎng)條件：將步驟（4）中已接種小球藻細胞的培養(yǎng)瓶置于光照培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)，溫度23~28℃，光照強度2200~2800lux，光暗比12h:12h，培養(yǎng)期間每天定時搖動培養(yǎng)瓶數(shù)次。