[發明專利]促進普通小球藻生長的培養基及用其培養小球藻的培養方法

無效

• 申請號: 201210388351.5
• 申請日: 2012-10-12
• 公開（公告）號: CN102943045A
• 公開（公告）日: 2013-02-27
• 發明（設計）人: 陳愛美;施慶珊;馮勁;林萬泉;黃小茉;歐陽友生;陳儀本
• 申請（專利權）人: 廣東省微生物研究所
• 主分類號: C12N1/12
• 分類號: C12N1/12;C12N1/38;C12R1/89
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星

技術領域：

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種促進普通小球藻生長的培養基及用其培養小球藻的培養方法。

背景技術：

小球藻（Chlorella）作為一種重要的微藻資源，具有極其豐富的營養成分和優良的醫療保健作用。其蛋白質含量50%-67%，其中含有人體所必需的20種氨基酸、多種維生素和微量元素，以及亞麻酸、亞油酸、胡蘿卜素等成分。其中二十碳五烯酸（EPA）和二十二碳六烯酸（DHA），醫學臨床已經證明這兩種成分具有多種重要的生理功能。其次，小球藻含有的多糖和蛋白質具有顯著的抗瘤抗癌、增強免疫及抗病毒感染的活性。在水產養殖上，單細胞的小球藻可直接作為草食性魚類和魚苗的餌料，或者作為肉食性魚類仔魚開口期食用的豐年蟲等動物的餌料。此外，小球藻在其生長時能消耗掉污水水體中的部分氮、磷，從而達到改善水質的目的，具有很高的經濟價值。

目前，小球藻的培養方式可分為自養培養和異養培養。小球藻的自養培養既可利用自然光，也可利用人工光照，培養基主要由無機化合物組成，最適pH為6.5-7.5，最適光照強度為36-90μmol/(m²·s)，溫度為20-30℃。目前，關于小球藻的自養培養技術已經成熟，但是隨著細胞的不斷增殖，進入培養物的光照被阻擋，導致光合作用減弱，從而限制了其生物量的進一步提高。

發明內容：

本發明的第一目的是提供一種促進普通小球藻生長的培養基。

本發明的促進普通小球藻生長的培養基，其特征在于，在常規的OECD培養液中加入可溶性稀土化合物，稀土離子終濃度為10^-6~10^-2mM。

所述的稀土化合物優選為硝酸鈰或氯化鈰。

本發明的第二個目的是提供一種促進普通小球藻生長的培養方法，其特征在于，以上述促進普通小球藻生長的培養基對小球藻進行培養。

優選，所述的培養方法具體為：將小球藻細胞接種到促進普通小球藻生長的培養基中，初始接種量為10⁵~10⁶cells/mL，在溫度23~28℃，光照強度2200~2800lux，光暗比12h：12h，進行培養。

本發明通過在OECD藻類培養液中加入可溶性稀土化合物，如硝酸鈰或氯化鈰，用其培養普通小球藻，所培養的普通小球藻細胞到達穩定期時，每升培養液可獲得細胞干物質43~59mg，比未添加稀土化合物的OECD藻類培養液提高34~69%，有效的提高了小球藻的產量，具有廣闊的應用前景。

附圖說明：

圖1是用本發明的促進普通小球藻生長的培養基對普通小球藻進行培養后的生長曲線圖。

具體實施方式：

以下實施例是對本發明的進一步說明，而不是對本發明的限制。

本發明的促進普通小球藻生長的培養方法的具體步驟如下：

配制OECD培養液：

表1：OECD培養液的配方

（1）按照儲備液1的配方，取各化合物溶于去離子水中，121℃，15min滅菌，得到儲備液1。按照儲備液2的配方，取各化合物溶于去離子水中，0.22μm濾膜過濾除菌，得到儲備液2。按照儲備液3的配方，取各化合物溶于去離子水中，121℃，15min滅菌，得到儲備液3。按照儲備液4的配方，取各化合物溶于去離子水中，0.22μm濾膜過濾除菌，得到儲備液4。再取儲備液110mL、儲備液21mL、儲備液31mL和儲備液41mL，混合后，用去離子水定容至1L，得到OECD培養液，該OECD培養液為藻類常規培養液。

（2）添加稀土化合物：將稀土化合物加入到步驟（1）獲得的OECD培養液中，使稀土離子的終濃度為10^-6~10^-2mM，得到促進普通小球藻生長的培養基。

（3）步驟（2）所述的稀土化合物可選擇硝酸鈰或氯化鈰。

（4）接種細胞：無菌條件下，將活化的普通小球藻細胞接種至含有步驟（2）獲得的促進普通小球藻生長的培養基的培養瓶中，使細胞初始濃度為10⁵~10⁶cells/mL。

（5）培養條件：將步驟（4）中已接種小球藻細胞的培養瓶置于光照培養箱中靜置培養，溫度23~28℃，光照強度2200~2800lux，光暗比12h:12h，培養期間每天定時搖動培養瓶數次。