[發明專利]一種白花蛇舌草抗癌活性組分的制備方法

有效

• 申請號: 201210386204.4
• 申請日: 2012-10-12
• 公開（公告）號: CN102961473A
• 公開（公告）日: 2013-03-13
• 發明（設計）人: 蒙秋霞;牛宇;張麗珍;牛偉
• 申請（專利權）人: 牛宇
• 主分類號: A61K36/748
• 分類號: A61K36/748;A61P35/00
• 代理公司: 太原科衛專利事務所(普通合伙) 14100
• 代理人: 朱源

技術領域

本發明涉及一種藥用植物的提取和成分富集方法，具體是一種白花蛇舌草抗癌活性組分的制備方法。

背景技術

現代社會中，癌癥在發達國家是第二位死亡原因（僅次于心臟?。?，在發展中國家是第三位死亡原因（僅次于心臟病和腸道傳染疾?。?，已成為世界范圍內一個主要健康問題，給病人、家庭和社會造成了巨大的身心痛苦和經濟負擔。隨著我國人口老齡化進程的加快，癌癥和其它老年疾病的發病率和死亡率預計將會增加。因此，尋求新穎、有效的癌癥治療藥物對減輕患者痛苦、減小家庭和社會的負擔具有重大意義。

從傳統藥用植物中分離有效的抗癌成分是新藥發現的一個熱點領域。白花蛇舌草（Hedyotis?diffusa?Willd.）為茜草科耳草屬植物的干燥全草，用于氣管炎、腸癰（闌尾炎）、瘡癤腫毒、濕熱黃疸、小便不利等癥，外用治瘡癤癰腫，毒蛇咬傷。白花蛇舌草作為一味抗腫瘤中藥，臨床上用于手術、放化療腫瘤病人的輔助治療，或中晚期腫瘤病人以中醫為主的抗癌治療。目前，在白花蛇舌草中發現的活性成分有萜類（三萜和環烯醚萜）、蒽醌類、黃酮類、甾醇和多糖等，其中三萜類和蒽醌類均與白花蛇舌草的抗癌作用相關。在體外和動物試驗中，主要三萜類成分熊果酸和齊墩果酸及蒽醌類成份2-羥基-3-甲基蒽醌對人白血病、直腸癌、肝癌、胃癌、宮頸癌、皮膚癌、成膠質細胞瘤的多種細胞株有明顯的抑制作用。目前按提取目標化合物的不同，白花蛇舌草的提取工藝分為沸水提取法、乙醇提取法及水提醇沉法。沸水提取法常用于湯劑制備，主要用于親水性化合物的提取，對于極性較小的三萜類和蒽醌類提取效果不佳；乙醇提取法主要用于親脂性化合物的提取，同時也可提取部分親水化合物；水提醇沉法則用于粗多糖的提取。這些方法耗時較長，提取效率也較低。目前白花蛇舌草的乙醇提取工藝僅停留在乙醇提取物的制備階段，對于運用減壓短柱層析富集其中有效成分的方法尚無報道。用乙醇提取的白花蛇舌草粗提物抗癌活性成分的含量較低，制約了具有高抗腫瘤活性的產品的開發。因此，探索白花蛇舌草三萜類和蒽醌類成分的超聲波輔助提取和減壓短柱層析富集工藝，制備具有抗癌活性的有效組分，開發具有高抗腫瘤活性的產品，對實現該藥材的精細加工、提高其加工效率和附加值具有重要意義。

發明內容

本發明的目的是提供一種白花蛇舌草抗癌活性組分的提取和制備方法，該方法可提高抗癌活性組分中的游離醌類與總三萜酸成分的含量。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案是：

一種白花蛇舌草抗癌活性組分的提取方法，包括以下步驟：（1）白花蛇舌草全草干燥、粉碎；（2）在室溫下，用正己烷超聲波輔助提取2-3次，抽濾分離正己烷提取液與余渣，余渣揮干正己烷；（3）室溫下，將步驟（2）中的余渣用85-95%乙醇超聲波輔助提取2-3次，得到乙醇提取液；（4）合并乙醇提取液，濃縮后得浸膏；（5）浸膏用無離子水重懸，分別用乙醚和乙酸乙酯萃取，重復3-5次，萃取液減壓濃縮蒸干，得到乙醚萃取物和乙酸乙酯萃取物；（6）將乙醚萃取物和乙酸乙酯萃取物混合，經硅膠減壓短柱層析（圖1），分別用正己烷-二氯甲烷、二氯甲烷-乙酸乙酯梯度洗脫，收集正己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯洗脫液，濃縮、冷凍干燥后得到白花蛇舌抗癌活性組分。

做為一種優選的技術方案，步驟（2）中，每次用正己烷提取時的液料比為1?kg：5-10?L，每次超聲波輔助提取30-60分鐘。

做為一種優選的技術方案，步驟（3）中，每次用乙醇提取時的液料比為1?kg：5-10?L，每次超聲波輔助提取30-60分鐘。

做為一種優選的技術方案，步驟（4）中，合并后的提取液在40-60℃真空濃縮。

做為一種優選的技術方案，步驟（5）中，萃取液在40-60℃減壓濃縮蒸干。

做為一種優選的技術方案，步驟（6）中，根據上樣量，以400-600?mg樣品/cm²柱底面積的比例選擇適合的層析用玻璃布氏漏斗；將步驟（5）的浸膏用乙酸乙酯溶解，70-230目硅膠拌樣，蒸干備用；400-800目硅膠干法裝柱于層析用玻璃布氏漏斗中，柱內硅膠高度在7-12?cm，后經減壓抽實至4-7?cm；樣品/硅膠混合物干法上樣，用正己烷洗脫至柱平衡，泵壓力8-12?mbar下，以高極性溶劑10-30%遞增的梯度依次用正己烷-二氯甲烷、二氯甲烷-乙酸乙酯溶劑組合減壓洗脫，每個梯度組合200-900?mL，每100?mL為一個流份，收集二氯甲烷：乙酸乙酯=80:20（v/v）至二氯甲烷：乙酸乙酯=0：100（v/v）洗脫液，40-60℃減壓濃縮后冷凍干燥。