[發明專利]一種檢測氟苯尼考和甲砜霉素的試紙及方法

有效

• 申請號: 201210384208.9
• 申請日: 2012-10-11
• 公開（公告）號: CN103728449A
• 公開（公告）日: 2014-04-16
• 發明（設計）人: 何方洋;羅曉琴;吳鵬;馮靜;蒲小容;田甜;陳煒玲
• 申請（專利權）人: 北京勤邦生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/558
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種檢測氟苯尼考和甲砜霉素的試紙及方法。?

背景技術

氟苯尼考、甲砜霉素與氯霉素均屬于氯霉素類藥物，其中甲砜霉素是氟苯尼考的衍生物，它們的抗菌作用與氯霉素相似。由于氯霉素藥物存在嚴重副作用，國際上相繼禁止或嚴格限制使用氯霉素。氟苯尼考與甲砜霉素均具有較高抗菌活性，現有替代氯霉素的趨勢，主要用于治療魚、豬、牛及家禽的細菌性疾病，已在養殖業中大規模使用。但是，氟苯尼考和甲砜霉素在畜禽生產上的大量應用也導致其在畜禽產品中殘留，危害公眾健康。歐盟（EEC）96/23指令中規定，甲砜霉素MRL值為50μg/kg，氟苯尼考MRL值為50~2000μg/kg，我國規定甲砜霉素在各種動物組織中的MRL值為50μg/kg，氟苯尼考標志殘留物為氟苯尼考胺，它在肌肉中MRL值為1000μg/kg。?

動物組織中氯霉素類藥物的殘留檢測主要為理化檢測法、免疫分析法。理化檢測方法有氣相色譜法、氣相色譜一質譜法等，理化檢測方法精確度高，但其存在檢測成本高，檢測設備復雜，對檢測人員的要求較高，檢測耗時長等缺點；目前常用的免疫學分析法，主要為酶聯免疫檢測法，其需要的檢測費用還是較高，不適合企業低成本的檢測需要。?

發明內容

本發明的一個目的是提供一種檢測氟苯尼考和甲砜霉素的試紙。?

本發明所提供的試紙包括微孔試劑和試紙條，微孔試劑具有微孔塞，試紙條包括底板、樣品吸收墊、反應膜、吸水墊、保護膜，其依次連接；所述微孔試劑中凍干有甲砜霉素藥物特異性抗體-膠體金標記物；甲砜霉素藥物特異性抗體可為甲砜霉素藥物單克隆抗體或甲砜霉素藥物多克隆抗體；反應膜上包被有檢測區和質控區；當甲砜霉素特異性抗體為甲砜霉素藥物單克隆抗體時，檢測區包被有甲砜霉素半抗原-載體蛋白偶聯物，質控區包被羊抗鼠抗抗體；當甲砜霉素藥物特異性抗體為甲砜霉素藥物多克隆抗體時，檢測區包被甲砜霉素半抗原-載體蛋白偶聯物，質控區包被羊抗兔抗抗體。?

所述保護膜粘貼在樣品吸收墊上，為檢測端，上面有MAX標記線。?

所述檢測區位于近于有MAX標記的保護膜的一側，所述質控區位于遠離有MAX標記線的保護膜的一側。?

所述甲砜霉素半抗原-載體蛋白偶聯物是由甲砜霉素半抗原與載體蛋白偶聯得到，所述載體蛋白可為牛血清白蛋白、卵清蛋白、血藍蛋白、甲狀腺蛋白、人血清白蛋白，兔血清白蛋白；所述甲砜霉素半抗原是由甲砜霉素與溴乙酸叔丁酯反應后脫脂得到的。?

所述甲砜霉素藥物特異性抗體-膠體金標記物中的甲砜霉素藥物特異性抗體是以甲砜霉素半抗原-載體蛋白偶聯物作為免疫原制備獲得。?

優選所述甲砜霉素單克隆抗體為由保藏號為CGMCC?No.?6067的甲砜霉素單克隆抗體雜交瘤細胞株D-4-1分泌的抗體。?

以羊作為免疫動物，以鼠源抗體為免疫原對無病原體羊進行免疫，得到羊抗鼠抗抗體；以羊作為免疫動物，以兔源抗體為免疫原對無病原體羊進行免疫，得到羊抗兔抗抗體。?

所述底板可為PVC底板或其他硬質不吸水的材料；樣品吸收墊可為吸濾紙或濾油紙；吸水墊為吸水紙；反應膜可為硝酸纖維素膜；保護膜為PE材質保護膜。?

本發明的另一個目的是提供了一種制備上述試紙的方法，其包括步驟：?

1）制備凍干有甲砜霉素藥物特異性抗體-膠體金標記物的微孔試劑；?

2）制備具有包被甲砜霉素半抗原-載體蛋白偶聯物的檢測區和包被抗抗體的質控區的反應膜；?

3）將2)制備好的反應膜與樣品吸收墊、吸水墊、保護膜、底板組裝成試紙條；?

4）將1）和3）制備好的凍干有甲砜霉素藥物特異性抗體-膠體金標記物的微孔試劑和試紙條組裝。?

具體的說，步驟包括：?

1）將甲砜霉素半抗原與載體蛋白偶聯，形成甲砜霉素半抗原-載體蛋白偶聯物；?

2）用甲砜霉素半抗原-載體蛋白偶聯物免疫小鼠，將小鼠脾細胞和小鼠骨髓瘤細胞通過融合、篩選，得到分泌甲砜霉素藥物單克隆抗體的雜交瘤細胞株或用甲砜霉素半抗原-載體蛋白免疫兔，得到甲砜霉素藥物多克隆抗體；?

3）提取小鼠IgG或兔IgG免疫健康山羊，得到羊抗鼠抗抗體或羊抗兔抗抗體；?

4）用檸檬酸三鈉與氯金酸反應制備膠體金；?

5）將制備的甲砜霉素藥物特異性抗體加入到制備的膠體金中，得到甲砜霉素藥物特異性抗體-膠體金標記物；?

6）將甲砜霉素藥物特異性抗體-膠體金標記物凍干在微孔試劑中后，將微孔試劑加上微孔塞；?