[發(fā)明專利]1號染色體替換野生小家鼠品系C57BL/6.棗莊2?Chr1的構(gòu)建

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210382423.5
• 申請日: 2012-10-10
• 公開（公告）號: CN103719021B
• 公開（公告）日: 2017-06-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 趙瑩;肖君華;邢正弘;陳國強;周宇荀;李凱;趙麗亞;晁天柱;柏熊;高捷
• 申請（專利權(quán)）人: 上海西普爾-必凱實驗動物有限公司;東華大學(xué)
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;A01K67/027;C12Q1/68
• 代理公司: 上海專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司31100
• 代理人: 陳靜

1.一種1號染色體替換實驗小鼠品系C57BL/6.棗莊2-Chr1的建立方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)以棗莊2品系雄性小鼠作為父本、C57BL/6品系雌性小鼠作為母本進(jìn)行雜交，獲得F1代小鼠；

(2)將F1代雌性小鼠與C57BL/6品系雄性小鼠雜交，獲得回交一代小鼠；該雄性回交小鼠中，Y染色體和線粒體DNA已被替換為C57BL/6品系來源的；使用多核苷酸多態(tài)性位點鑒定雄性回交小鼠的1號染色體，選擇1號染色體多核苷酸多態(tài)性位點鑒定結(jié)果為棗莊2品系小鼠所特有的雄性回交小鼠；使用短串聯(lián)重復(fù)序列位點鑒定選擇到的雄性回交小鼠，選擇1號染色體短串聯(lián)重復(fù)序列位點鑒定結(jié)果為棗莊2品系小鼠所特有的回交小鼠；

(3)將選擇到的1號染色體短串聯(lián)重復(fù)序列位點鑒定結(jié)果為棗莊2品系小鼠所特有的回交小鼠中雄性回交小鼠與C57BL/6品系雌性小鼠雜交，獲得下一代回交小鼠，該雄性回交小鼠中，X染色體已被替換為C57BL/6品系來源的；

(4)使用多核苷酸多態(tài)性位點鑒定步驟(3)獲得的雄性回交小鼠的1號染色體，選擇1號染色體多核苷酸多態(tài)性位點鑒定結(jié)果為棗莊2品系小鼠所特有的雄性回交小鼠；使用短串聯(lián)重復(fù)序列位點鑒定選擇到的雄性回交小鼠，選擇1號染色體短串聯(lián)重復(fù)序列位點鑒定結(jié)果為棗莊2品系小鼠所特有的雄性回交小鼠；

(5)重復(fù)步驟(3)～(4)5-50次；從而獲得染色體替代動物品系，其以C57BL/6品系小鼠為背景，且其1號染色體被棗莊2品系小鼠的1號染色體替換；

其中，所述的1號染色體多核苷酸多態(tài)性位點包括：

rs30719154，其在1號染色體上所處位置為chr1：3052360；在棗莊2品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為G，在C57BL/6品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為T；

rs31426703，其在1號染色體上所處位置為chr1：12720994；在棗莊2品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為C，在C57BL/6品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為T；

rs32086848，其在1號染色體上所處位置為chr1：17643006；在棗莊2品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為G，在C57BL/6品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為A；

rs31928308，其在1號染色體上所處位置為chr1：28659508；在棗莊2品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為A，在C57BL/6品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為G；

rs32139742，其在1號染色體上所處位置為chr1：40806614；在棗莊2品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為G，在C57BL/6品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為A；

rs31336640，其在1號染色體上所處位置為chr1：47136503；在棗莊2品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為G，在C57BL/6品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為A；

rs6297658，其在1號染色體上所處位置為chr1：57382018；在棗莊2品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為A，在C57BL/6品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為G；

rs6302815，其在1號染色體上所處位置為chr1：69463837；在棗莊2品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為A，在C57BL/6品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為G；

rs30146639，其在1號染色體上所處位置為chr1：76144374；在棗莊2品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為G，在C57BL/6品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為A；

rs32011713，其在1號染色體上所處位置為chr1：79917356；在棗莊2品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為C，在C57BL/6品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為A；

rs6212353，其在1號染色體上所處位置為chr1：84131501；在棗莊2品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為C，在C57BL/6品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為A；

rs32662004，其在1號染色體上所處位置為chr1：98333575；在棗莊2品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為G，在C57BL/6品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為A；

rs32495825，其在1號染色體上所處位置為chr1：124737843；在棗莊2品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為G，在C57BL/6品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為A；

rs31580048，其在1號染色體上所處位置為chr1：133446374；在棗莊2品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為G，在C57BL/6品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為A；

rs30694738，其在1號染色體上所處位置為chr1：142191205；在棗莊2品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為A，在C57BL/6品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為G；

rs30902647，其在1號染色體上所處位置為chr1：150127783；在棗莊2品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為T，在C57BL/6品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為C；

rs3678938，其在1號染色體上所處位置為chr1：158391632；在棗莊2品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為G，在C57BL/6品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為A；

rs30776510，其在1號染色體上所處位置為chr1：168028380；在棗莊2品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為T，在C57BL/6品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為G；

rs32297231，其在1號染色體上所處位置為chr1：183890447；在棗莊2品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為G，在C57BL/6品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為A；

rs31145145，其在1號染色體上所處位置為chr1：192018789；在棗莊2品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為C，在C57BL/6品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為T；

rs32357522，其在1號染色體上所處位置為chr1：192018789；在棗莊2品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為C，在C57BL/6品系小鼠染色體相應(yīng)位置的堿基為T；

其中，所述的1號染色體的短串聯(lián)重復(fù)序列位點包括：

D1MIT64，其在1號染色體上所處位置為3.7cM；在棗莊2品系小鼠基因組和C57BL/6品系小鼠染色體中，相應(yīng)位置上基因序列長度差異20bp，棗莊2品系小鼠比C57BL/6品系小鼠少10個2bp堿基重復(fù)；

D1MIT236，其在1號染色體上所處位置為25.7cM；在棗莊2品系小鼠基因組和C57BL/6品系小鼠染色體中，相應(yīng)位置上基因序列長度差異16bp，棗莊2品系小鼠比C57BL/6品系小鼠少8個2bp堿基重復(fù)；

D1MIT303，其在1號染色體上所處位置為32cM；在棗莊2品系小鼠基因組和C57BL/6品系小鼠染色體中，相應(yīng)位置上基因序列長度差異20bp，棗莊2品系小鼠比C57BL/6品系小鼠多10個2bp堿基重復(fù)；

D1MIT49，其在1號染色體上所處位置為44cM；在棗莊2品系小鼠基因組和C57BL/6品系小鼠染色體中，相應(yīng)位置上基因序列長度差異6bp，棗莊2品系小鼠比C57BL/6品系小鼠少3個2bp堿基重復(fù)；

D1MIT445，其在1號染色體上所處位置為58cM；在棗莊2品系小鼠基因組和C57BL/6品系小鼠染色體中，相應(yīng)位置上基因序列長度差異14bp，棗莊2品系小鼠比C57BL/6品系小鼠多7個2bp堿基重復(fù)；

D1MIT506，其在1號染色體上所處位置為71cM；在棗莊2品系小鼠基因組和C57BL/6品系小鼠染色體中，相應(yīng)位置上基因序列長度差異30bp，棗莊2品系小鼠比C57BL/6品系小鼠多15個2bp堿基重復(fù)；

D1MIT113，其在1號染色體上所處位置為79cM；在棗莊2品系小鼠基因組和C57BL/6品系小鼠染色體中，相應(yīng)位置上基因序列長度差異14bp，棗莊2品系小鼠比C57BL/6品系小鼠多7個2bp堿基重復(fù)；

D1MIT150，其在1號染色體上所處位置為81cM；在棗莊2品系小鼠基因組和C57BL/6品系小鼠染色體中，相應(yīng)位置上基因序列長度差異10bp，棗莊2品系小鼠比C57BL/6品系小鼠多5個2bp堿基重復(fù)；

D1MIT209，其在1號染色體上所處位置為96cM；在棗莊2品系小鼠基因組和C57BL/6品系小鼠染色體中，相應(yīng)位置上基因序列長度差異8bp，棗莊2品系小鼠比C57BL/6品系小鼠多4個2bp堿基重復(fù)。