[發(fā)明專利]氨氧化細(xì)菌篩選鑒定試劑盒、篩選鑒定及菌樣分離方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210381366.9
• 申請(qǐng)日: 2012-10-10
• 公開（公告）號(hào): CN102864075A
• 公開（公告）日: 2013-01-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李博智;武震;宋文軍;魏紀(jì)平;朱高雄
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津市興源環(huán)境技術(shù)工程有限公司;天津清鑒生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12M1/34
• 分類號(hào): C12M1/34;C12Q1/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明屬于一種細(xì)菌篩選鑒定方法及試劑盒，特別涉及一種氨氧化細(xì)菌篩選鑒定試劑盒、篩選鑒定及菌樣分離方法。

背景技術(shù)：

氨氮是引起水體污染的重要物質(zhì)之一。目前城市污水中含有大量的氨氮，若直接排放到自然環(huán)境中會(huì)造成嚴(yán)重的環(huán)境污染，導(dǎo)致河流、湖泊的富營(yíng)養(yǎng)化，使水體自凈能力減弱。生物脫氮是目前廢水脫氮中最經(jīng)濟(jì)有效的方法之一，而氨氮的轉(zhuǎn)化依賴于硝化微生物的作用。污水生物脫氮包括硝化階段和反硝化階段。其中硝化階段包括兩個(gè)階段：（1）將NH⁴⁺-N氧化為NO^2--N的氨氧化菌（Ammonia?oxidizing?bacteria，AOB）；（2）將NO^2--N氧化為NO^3--N的亞硝酸鹽氧化菌（Nitrite?oxidizing?bacteria，NOB）。經(jīng)過硝化過程形成的硝酸鹽通過反硝化作用形成氮?dú)庖莩鏊w完成脫氮。在硝化階段中，由氨氮氧化為亞硝氮的氨氧化過程是整個(gè)反應(yīng)的限速步驟，因此加速氨氧化菌的富集、快速生長(zhǎng)是目前急需解決的問題。

目前有大量針對(duì)氨氧化細(xì)菌的篩選、分離培養(yǎng)的研究。專利CN1884480A描述了一種用牛肉膏培養(yǎng)基進(jìn)行富集，然后從牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基上挑取單菌落，接種到氨氧化培養(yǎng)基獲得氨氧化細(xì)菌。專利CN?101434905A描述了一種通過逐步提高氨氮負(fù)荷的方法培養(yǎng)能耐受高濃度氨氮負(fù)荷的活性污泥，再?gòu)幕钚晕勰嘀蟹蛛x篩選單菌。專利CN?102268386A描述了一種將污泥進(jìn)行富集后用硅膠平板進(jìn)行涂布，挑取單菌落在含甲酚紅的平板上劃線分純得到氨氧化細(xì)菌。目前各種篩選氨氧化細(xì)菌的方法均取得了不錯(cuò)的結(jié)果，但是對(duì)于氨氧化細(xì)菌的篩選鑒定一般均采用人工培養(yǎng)基進(jìn)行間接驗(yàn)證，沒有在污水環(huán)境下進(jìn)行驗(yàn)證或?qū)⒔Y(jié)果與污水環(huán)境進(jìn)行擬合對(duì)比。并且采用傳統(tǒng)的驗(yàn)證方法存在工作量大、效率低的問題。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明的目的在于克服上述的缺陷，提供一種氨氧化細(xì)菌篩選鑒定試劑盒、篩選鑒定方法及菌樣分離方法；該方法是通過實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)了一系列人工氨氧化鑒定培養(yǎng)基對(duì)微生物進(jìn)行氨氧化能力鑒定，并且經(jīng)過與微生物在市政污水、醫(yī)療污水中的氨氧化結(jié)果進(jìn)行對(duì)比擬合，最終設(shè)計(jì)出了3組人工氨氧化鑒定培養(yǎng)基對(duì)微生物進(jìn)行氨氧化效果鑒定，其結(jié)果可以百分之百覆蓋、模擬微生物在污水環(huán)境下的氨氧化效果；該試劑盒是將篩選出的人工鑒定培養(yǎng)基制備成無菌預(yù)制管，并結(jié)合菌株富集管、氨氧化鑒定管、菌株保藏液，顯色劑的一種可以高通量、操作簡(jiǎn)單、快速的一站式氨氧化細(xì)菌篩選鑒定試劑盒。

本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：一種氨氧化細(xì)菌篩選鑒定試劑盒，其特征在于：它是由菌株富集管、氨氧化鑒定管1-3、菌株保藏液、顯色劑A和顯色劑B組成；其中:

菌株富集管：

菌株富集管中裝有富集培養(yǎng)基，每升富集培養(yǎng)基所含成分如下：硫酸銨250-780mg，葡萄糖0.8-2.1g，磷酸二氫鉀480-890mg，磷酸氫二鈉0.7-1.5g，硫酸鎂100-200mg，氯化鈣5-50mg，碳酸氫鈉20-120mg，微量元素母液A?1ml，微量元素母液B?1ml，以上培養(yǎng)基用濃度5%的碳酸鈉和HCl調(diào)pH至7.00-8.50；

富集培養(yǎng)基配制完成并調(diào)完pH后，將富集培養(yǎng)基分裝到1.8ml螺口凍存管中，每支凍存管加入富集培養(yǎng)基0.8ml，分裝完畢后，115℃滅菌20-30min；

氨氧化鑒定管1：

氨氧化鑒定管1中裝有氨氧化鑒定培養(yǎng)基（1），每升氨氧化鑒定培養(yǎng)基（1）所含成分如下：硫酸銨250-780mg，葡萄糖0.1-1.2g，磷酸二氫鉀480-890mg，磷酸氫二鈉0.7-1.5g，硫酸鎂100-200mg，氯化鈣5-50mg，碳酸氫鈉20-120mg，微量元素母液A?1ml，微量元素母液B?1ml，以上培養(yǎng)基用濃度5%的碳酸鈉和HCl調(diào)pH至7.00-8.50；氨氧化鑒定培養(yǎng)基（1）配制完成并調(diào)完pH后，將氨氧化鑒定培養(yǎng)基（1）分裝到1.8ml螺口凍存管中，每支凍存管加入氨氧化鑒定培養(yǎng)基（1）0.8ml，分裝完畢后115℃滅菌20-30min；

氨氧化鑒定管2：