[發(fā)明專利]檢測卵巢腫瘤的血清學生物標記物miR-451及用途

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210380625.6
• 申請日: 2012-10-09
• 公開（公告）號: CN102864238A
• 公開（公告）日: 2013-01-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 丁先鋒;紀婷;孟麗;黃志雄
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江理工大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/113
• 代理公司: 杭州中成專利事務(wù)所有限公司 33212
• 代理人: 金祺

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)和醫(yī)學領(lǐng)域，涉及一種卵巢癌腫瘤的生物標記物-血清microRNA-451(miR-451)，及其篩選方法和在輔助卵巢篩查與臨床診斷中的應(yīng)用。?

背景技術(shù)

卵巢癌(ovarian?carcinoma)是女性生殖器官常見的腫瘤之一，大多數(shù)是由于卵巢上皮細胞和包涵囊腫組織上皮細胞在多種致癌因子作用下，發(fā)生了基因突變，致使細胞增生失控。卵巢癌是死亡率極高的婦科惡性腫瘤，其組織學形態(tài)多種多樣，是一類高度異質(zhì)性的腫瘤，具有發(fā)病率高、但病程進展緩慢、早期癥狀不易察覺；且侵襲轉(zhuǎn)移能力較強、自然生存期長等特點。在臨床檢查中，多采用CA-125水平檢測、超聲檢查、以及聯(lián)合CA-125動態(tài)監(jiān)測和盆腔超聲檢查及彩色多普勒血流顯像等檢測方法盡可能的提高卵巢檢出率。但目前80%的卵巢癌病人發(fā)現(xiàn)時已是中晚期(Ⅱ-Ⅳ)，采取腫瘤細胞減滅術(shù)以及化療患者的5年存活率僅為20%左右,且治療比較復雜，預(yù)后效果比較差。雖然早期診斷及輔助化療和激素治療使得卵巢癌的死亡率有所降低，但在導致女性死亡的惡性腫瘤中卵巢癌仍居世界前列。?

MiRNA(MicroRNA)是一類生物體內(nèi)自然形成的小分子非編碼RNA，參與調(diào)節(jié)其特異靶基因的表達，從而控制蛋白的產(chǎn)生，具有調(diào)節(jié)發(fā)育時序，細胞增殖，分化，代謝，凋亡與應(yīng)激以及參與脊椎動物心臟、肌肉以及神經(jīng)系統(tǒng)的形成，同時調(diào)控腫瘤發(fā)生的功能。約50%的已知人類miRA基因定位于和腫瘤相關(guān)的染色體區(qū)域，而不斷累積的研究成果也已充分證實miRNA的異常表達與腫瘤的發(fā)生，發(fā)展密切相關(guān)。?

高通量測序是基于傳統(tǒng)的Sanger測序的基礎(chǔ)上發(fā)展而來的分子生物學的分析方法之?

一是，雖然此技術(shù)建立時間不長，但其發(fā)展速度相當快。該技術(shù)能夠?qū)?shù)百萬個分子進行同時測序。這使得對一個物種的轉(zhuǎn)錄組和基因組進行細致全貌的分析成為可能。高通量測序的具有傳統(tǒng)測序法達不到的優(yōu)點，首先，它是利用芯片技術(shù)進行測序，可以在數(shù)百萬個點上同時閱讀測序，把利用平行處理的方略讀取結(jié)果，通量較高；其次，高通量測序具有精確地樣本定量功能，其原理為樣本的DNA或者RA被測序的次數(shù)反應(yīng)了在樣品中的豐度；同時高通量測序的成本相對較為低廉。對于miRNA序列較短、同源性高，利用芯片?檢測非常困難。而利用高通量技術(shù)不僅能夠解決此問題，而且能夠發(fā)現(xiàn)新的miRNA。利用此技術(shù)對卵巢腫瘤患者血清與健康血清樣本分別進行測序，并對比其序列組成以及表達譜特征，對于發(fā)現(xiàn)生物標記物用于卵巢疾病的早期診斷有重要的意義。?

生物標記物是指能將機體的生理和病理狀態(tài)區(qū)分開來的生物分子。篩選到可用于腫瘤早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷的生物標記物可大大提高腫瘤患者的臨床治療效果。最新數(shù)據(jù)顯示腫瘤組織普遍具有特征性的miRNA表達譜，即指腫瘤細胞某幾種miRNA的表達水平常與同一組織中的正常細胞存在顯著差異，而特征性的miRNA異常表達可望成為用于腫瘤的診斷、病理分級、臨床分期、療效與預(yù)后的生物標記物，顯示了良好的臨床應(yīng)用前景。?

近年來研究人員發(fā)現(xiàn)在血漿和血清中也存在獨立于細胞之外并且即使在嚴酷環(huán)境下也能明顯保持穩(wěn)定的miRNA分子，而作為生物檢測樣本，血清具有取材方便、無創(chuàng)傷性、并可連續(xù)的體外檢測的優(yōu)點，使得基于miRNA定性和定量檢測技術(shù)尋找癌癥特異性的血清miRNA作為分子標記的方法比傳統(tǒng)的蛋白分子標記方法將更加有效，進而可以克服分子標記在抗體制備和定量分析上發(fā)展所遇到的瓶頸。因此，開發(fā)一種可輔助卵巢癌篩查和診斷的血清miRNA作為生物標記物，具有廣泛的科研價值和臨床應(yīng)用前景。?

目前已有實驗證實，microRNA在血液中被有效地保護，使其免受在血液中大量存在的RNase的降解，表現(xiàn)出高度的穩(wěn)定性。對于血液microRNA能否作為一種無創(chuàng)性檢測手段，目前的研究主要集中在癌癥的早期診斷方面。然而，目前還沒有將血清/血漿microRNA應(yīng)用于卵巢疾病的輔助判斷、危險度評價等方面的報道，若能篩選與卵巢組織病理狀態(tài)有關(guān)的特異或異常表達的血清/血漿microRNA作為疾病檢測的生物標志物，并研制相應(yīng)的檢測試劑盒，將會大大提升卵巢腫瘤疾病的檢測水平。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種具有較高靶向性、穩(wěn)定性及高效率檢測卵巢腫瘤的血清學生物標記物miR-451及其用途。?

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種檢測卵巢腫瘤的血清學生物標記物miR-451，其miRNA序列為：?

miR-451：aaaccguuaccauuacugaguu。?