[發明專利]超高壓提取金銀花中綠原酸和木犀草苷及液相分析方法

無效

• 申請號: 201210380404.9
• 申請日: 2012-10-10
• 公開（公告）號: CN103257187A
• 公開（公告）日: 2013-08-21
• 發明（設計）人: 李賀然;胡文;李永霞;劉順;郝杰;王炳義
• 申請（專利權）人: 蘇州大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 曹毅

技術領域

本發明生物技術領域，具體的涉及一種快速、高效提取金銀花中綠原酸和木犀草苷并進行HPLC定量分析方法。

背景技術

金銀花為忍冬科植物忍冬(Lonicera?japonica?Thunb.?)的干燥花蕾或帶初開的花,具有清熱解毒、抗菌消炎、保肝利膽的功能、涼熱散風、抗病毒和增強免疫力的功效,是常用中藥材之一。綠原酸和木犀草苷是金銀花藥材中代表性的藥效成分，并且2010版《中國藥典》已經增加了對木犀草苷含量檢測項目。?金銀花中綠原酸和木犀草苷的提取方法主要有水煎煮法、有機溶劑回流提取法、超聲提取法、微波提取法、超臨界CO2萃取等。水煎煮法和有機溶劑回流提取法在較高溫度下進行,容易導致活性有效成分的損失,分解、變化，產物中雜質含量高，提取時間長，工藝繁瑣等。而微波提取和超聲提取雖然提取時間、能耗等大大降低，但存在噪音大、難以規模化生產等不足。超臨界CO2萃取法存在設備投資大，耗費高，對相對分子質量高、極性強的物質提取困難等問題。此外，2010版《中國藥典》分別采用不同的HPLC分析方法對綠原酸和木犀草苷的含量進行測定，測定時間長，不利于快速分析和大批量樣品質量控制的需要。因此，開發一種快速、高效提取金銀花中綠原酸和木犀草苷并同時對該兩種成分進行HPLC定量分析的方法,對金銀花藥材及相關產品的質量控制具有較高的應用價值。

目前已有超高壓技術提取金銀花的報道，但運用超高壓提取技術來提取金銀花中綠原酸和木犀草苷并建立一種HPLC方法來同時測定這兩種成分的方法還未見報道。

發明內容

為克服現有技術中的不足，本發明提供一種快速、高效提取金銀花中綠原酸和木犀草苷并進行HPLC定量分析方法。

為實現上述技術目的，達到上述技術效果，本發明通過以下技術方案實現：

一種快速、高效提取金銀花中綠原酸和木犀草苷并進行HPLC定量分析方法，包括如下步驟：

1）超高壓提取：首先將干燥的的金銀花粉碎過60-80目篩，再將金銀花粉末按1:10-1:100的固液比加入水或乙醇（濃度為10%-90%）、甲醇、正丁醇有機溶劑，混合密封后在常溫下浸泡0?-24?h，再將該混合物置于高壓容器中，在20-60℃下施加100-500MPa壓力進行浸取，其保壓時間為1-5min，卸壓后將提取物進行離心分離，得金銀花提取液。

2）定量分析：取離心后得到的上清液2ml于10ml的容量瓶中，用蒸餾水定容，冷藏備用；HPLC條件為：Cosmosil?π-NAP?C_18?色譜柱(5?μm,?4.6?mm?×?250?mm)；流動相：A：B?=?乙腈：0.4%磷酸溶液；梯度洗脫條件：0～15min，B：90-80%，15～30min，B：80%，30～40min，B:?80-70%；柱溫：30℃；流速：1ml/min；檢測波長：327nm，350nm；進樣量：20μL。?

進一步的，所述步驟（1）中的超高壓提取(ultrahigh-pressure?extraction,UHPE),?全稱為“冷等靜壓技術”，是指在常溫下用100-1000MPa的流體靜壓力作用于提取溶劑和中藥的混合液上,?并在預定壓力下保持一段時間,?使植物細胞內外壓力達到平衡后迅速卸壓。由于細胞內外滲透壓力忽然增大,?細胞膜的結構發生變化,?使得細胞內的有效成分能夠穿過細胞的各種膜而轉移到細胞外的提取液中,?達到提取中藥有效成分的目的。

與現有技術相比，本發明具有以下有益效果：

（1）目前傳統的提取方法需要加熱，容易造成金銀花中有效成分的破壞、變性。本方法在40℃下進行，避免了因熱效應引起的有效成分結構變化損失以及生理活性的降低。而且，已有研究報道，生物材料受高壓作用時，只有大分子物質發生變性，而小分子物質不會受影響。因此，超高壓提取時不會發生綠原酸和木犀草苷的破換、變性。

（2）應用超高壓技術提取綠原酸和木犀草苷可以大大縮短提取時間，僅為4?min，是回流提取的2%，能量消耗低，同時超高壓提取是在一個密閉的環境中進行的，沒有溶劑的揮發，因此該技術更加符合綠色環保的要求。

（3）跟傳統方法相比，超高壓提取的效率高，而且提取液中的雜質含量低，有利于活性物質的分離和純化。

（4）新建立的HPLC分析方法能同時對綠原酸和木犀草苷進行分析，簡單、準確、快速、緊密度高、重復性好，對金銀花藥材及相關產品的質量控制具有較高的應用價值。