[發明專利]一種VEGF單抗及包含該單抗的骨折愈合評價抗體芯片

無效

• 申請號: 201210379559.0
• 申請日: 2012-10-09
• 公開（公告）號: CN102863529A
• 公開（公告）日: 2013-01-09
• 發明（設計）人: 李彬
• 申請（專利權）人: 李彬
• 主分類號: C07K16/22
• 分類號: C07K16/22;G01N33/577;C40B40/10
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 馮瓊

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別涉及一種VEGF單抗及包含該單抗的骨折愈合評價抗體芯片。

背景技術

血管生成在骨折愈合過程中具有重要意義。新的血管形成可能與諸多因素有關，如成纖維細胞生長因子、骨形態發生蛋白、轉化生長因子。血小板衍生長因子、前列腺素E、血管內皮細胞生長因子、腫瘤壞死因子、胰島素生長因子Ⅰ等。

血管內皮細胞生長因子(VEGF)對內皮細胞有促進其增殖和血管生成，增加血管通透性，尤為重要。VEGF通過與血管內皮細胞上的受體結合，具有強大、特異性促血管內皮細胞增生和血管生成作用，是促血管再生的最終通道，其他因子的促血管生成作用是全部或部分通過VEGF的作用得以實現。應用VEGF使骨折端血流量在一定時間內較對照組增高;抗VEGF可導致骨折端血流量明顯減少，說明VEGF對骨折端血流量變化可能影響骨折愈合，有重要意義。

腦外傷后體液中存在促進骨髓基質干細胞有絲分裂和增殖的細胞因子。其中骨形態發生蛋白（BMP-2）是骨折成功愈合的極重要的因素，然而骨形態發生蛋白似乎并非是腦外傷后骨折愈合加速因素之一；腦外傷后堿性成纖維細胞生長因子（bFGF）陽性表達提前出現，與血管內皮細胞生長因子(VEGF)有明顯的時間和濃度關系，通過血管內皮細胞生長因子的表達促進成骨化；胰島素生長因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)在骨折愈合中主要促進軟骨的生長；腦源性神經（BDNF）營養因子在骨折愈合各個階段均有促進作用；血小板衍生因子血清濃度明顯低于其他組，作用機制可能是通過血清中胰島素生長因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)含量的升高以及局部血小板衍生因子的聚集來完成的，胰島素生長因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)血清濃度升高的時間和血小板衍生因子(PDGF)降低的時間均集中在前兩周，時間上一致，兩者之間可能有協同作用；上皮生長因子（EGF）主要是由炎癥細胞單核/巨噬細胞分泌，同時作用于修復細胞成纖維細胞、內皮細胞、表皮細胞等，具有促進細胞增殖的功能。但是，高效價、高特異性的抗人VEGF單克隆抗體及骨折愈合評價抗體芯片目前尚未見到報道。

發明內容

本發明的目的在于提供一種VEGF單抗及包含該抗體的芯片以及應用。

本發明的整體技術構思是：利用自主設計合成的VEGF多肽（序列為IFQEYPDEIE?YIFKPS）經免疫動物、細胞融合、亞克隆及酶聯免疫吸附實驗進行特異性篩選技術，獲得高效價、高特異性抗人VEGF單克隆抗體，由于此單抗效價高、特異性好，與另外7種與骨折愈合相關的單克隆抗體點制的抗體芯片，結合CY3標記的補體C3抗體與被檢產品建立了完整的檢測系統，用于檢測及評價骨折愈合效果。此抗體芯片具有靈敏度高，特異性好、操作簡單、高通量等優點，可用于臨床和體檢血清的監測和質控。

作為優選，所述單克隆抗體包括單鏈抗體、雙鏈抗體、嵌合抗體、人源化抗體、以及上述抗體的衍生物、功能等同物和同源物，也包括抗體片段和含有抗原結合結構域的任何多肽。

本發明所述“抗體”應該解釋為涵蓋具有所需特異性的結合結構域的任意特異性結合因子。因而，這個術語涵蓋了與之同源的抗體片段、衍生物、人源化抗體以及抗體的功能等同物和同源物，也包括含有抗原結合結構域的任何多肽，無論是天然的還是合成產生的。抗體的實例是免疫球蛋白亞型(如IgG，IgE，IgM，IgD和IgA)及其亞型亞類；也可以是包含抗原結合結構域的片段如Fab、scFv、Fv、dAb、Fd；和雙鏈抗體(diabodies)。融合至另一多肽的、包含抗原結合結構域的嵌合體分子或者等同物也包括在其中。嵌合抗體的克隆與表達在EP．A-0120694和EP．A．0125023中描述。

本發明所述單克隆抗體可以是，例如，單價的或是單鏈抗體、雙鏈抗體、嵌合抗體、人源化抗體、以及上述抗體的衍生物、功能等同物和同源物，也包括抗體片段和含有抗原結合結構域的任何多肽。

抗體可以通過許多方式修飾，可用DNA重組技術來產生保留原來抗體特異性的其它抗體或嵌合分子。這種技術可以包括將編碼抗體的免疫球蛋白可變區或互補性決定區(CDRs)的DNA引入不同免疫球蛋白的恒定區或恒定區加框架區。參見，EP．A．184187，GB?2188638A或．EP．A．239400。還可以對雜交瘤細胞或產生抗體的其它細胞進行遺傳突變或其它改變，這可以改變或者不改變所產生抗體的結合特異性。