[發(fā)明專利]胰激肽釋放酶的一種制取方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210378491.4
• 申請(qǐng)日: 2012-10-09
• 公開（公告）號(hào): CN102864135A
• 公開（公告）日: 2013-01-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周青
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 青海華邦生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N9/64
• 分類號(hào): C12N9/64
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種胰激肽釋放酶的制備方法，其特征在于首先畜禽胰腺經(jīng)高速組織搗碎機(jī)處理，后在酸性條件下制備粗胰激肽釋放酶，再過(guò)濾，磁性親和分離，超濾濃縮，冷凍干燥，得到胰激肽釋放酶產(chǎn)品。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備胰激肽釋放酶的方法，其特征在于畜禽包括：豬、牛、羊等。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備胰激肽釋放酶的方法，其特征在于制備粗胰激肽釋放酶的工藝步驟為：畜禽胰腺經(jīng)高速組織搗碎機(jī)處理，在pH值5.5條件下，添加2-5倍原料量的預(yù)冷的25％乙醇和3-6％原料量的CaCl₂，攪拌制取粗胰激肽釋放酶。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備胰激肽釋放酶的方法，其特征在于攪拌速度為60～90r/min，15-25℃下提取2-3h。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備胰激肽釋放酶的方法，其特征在于磁性親和分離的工藝步驟為：在胰激肽釋放酶粗品中加入0.02-0.05mol/L?PBS，0.1-0.3mol/L?NaCl，0.01-0.03g/L?Tween-80(pH7.2)的緩沖溶液，然后加入磁性親和吸附劑，緩慢攪拌1-2h，用磁鐵將吸附劑吸附在容器側(cè)壁上，傾去上清液及未被磁場(chǎng)吸附的不溶物，用上述緩沖溶液洗滌3次，然后用0.1mol/L?NaOAc，0.4mol/L?NaCl，0.01g/L?Tween-80(pH4.0)溶液洗脫。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備胰激肽釋放酶的方法，其特征在于選用以磁性瓊脂糖微球(MAMS)為基質(zhì)，胍基乙酸(GAA)為配體的磁性親和吸附劑，環(huán)氧氯丙烷(ECH)為活化劑，1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDC·HCl)為偶聯(lián)試劑，己二胺(DAH)為間隔臂。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備胰激肽釋放酶的方法，其特征在于超濾濃縮采用截留分子量為10000Da的超濾膜。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備胰激肽釋放酶的方法，其特征在于冷凍干燥的工藝步驟為：將濃縮后的洗脫液經(jīng)預(yù)凍、低溫升華、高溫干燥3個(gè)階段進(jìn)行冷凍干燥，得到優(yōu)質(zhì)胰激肽釋放酶。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備胰激肽釋放酶的方法，其特征在于所得胰激肽釋放酶酶活可達(dá)1100U/mg以上。