[發(fā)明專利]一種一步法乙肝病毒PreS1抗原酶聯(lián)免疫測定試劑盒

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210376964.7
• 申請日: 2012-10-08
• 公開（公告）號: CN103048456A
• 公開（公告）日: 2013-04-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張年
• 申請（專利權(quán)）人: 武漢康珠生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/576
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種“一步法乙肝病毒PreS1抗原酶聯(lián)免疫測定試劑盒”，其特征在于該試劑盒包括：

(1)用親和素先包被酶標板，并加入生物素標記的前S1單克隆抗體或抗HBS進行二次包被反應(yīng)，制成抗體預(yù)包被反應(yīng)條48-96孔；

(2)酶標記前S1抗體；

(3)陽性對照液1支、陰性對照液1支；

(4)20倍濃縮洗液1瓶；

(5)底物緩沖液甲1瓶；

(6)底物緩沖液乙1瓶；

(7)終止液(4N?H2SO4)1瓶組成。

2.一種如權(quán)利1所描述的一種“一步法乙肝病毒PreS1抗原酶聯(lián)免疫測定試劑盒”的制備方法，其特征在于該方法包括下列步驟：

(1)利用HBV-DNA重組PreS1?Ag基因片段通過原核表達或者真核表達制備抗原；

(2)制備抗體的制備和純化：用上述重組抗原免疫豚鼠，得抗PreS1抗血清或免疫Balb/C小鼠得陽性鼠脾細胞與骨髓瘤細胞融合成雜交瘤細胞，篩選陽性克隆建株，得腹水；抗血清或腹水用鹽析、離子交換層析、或者親和層析法進行純化，得純抗PreS1抗體，其純度95％以上，效價大于10萬。

(3)用親和素先包被酶標板，并加入生物素標記的抗乙肝病毒PreS1單克隆抗體或抗HBS進行二次包被反應(yīng)，制成抗體預(yù)包被反應(yīng)條48-96孔；

(4)辣根過氧化物酶(HRP)與純化的抗乙肝病毒PreS1抗體酶聯(lián)，制成酶標抗體；

(5)配制陽性對照液、陰性對照液；

(6)配制20倍濃縮洗液；

(7)配制底物緩沖液甲；

(8)配制底物緩沖液乙；

(9)配制終止液(2N?H2SO4)。

(10)分裝上述試劑盒除預(yù)報被板其余七種成分，按需要分裝在小瓶或尖底離心管中；

(11)檢定試劑盒的特異性、靈敏度、精密性、穩(wěn)定性合格；

(12)組裝成成品。

3.根據(jù)權(quán)利1所述的一種“一步法乙肝病毒PreS1抗原酶聯(lián)免疫測定試劑盒”，其特征在于其中所述的抗體預(yù)包被反應(yīng)條48-96孔、酶標記前抗體、陽性對照液為HBV-DNA和HBeAg均陽性血清，陰性對照液為正常人血清、濃洗滌液為磷酸-Tween-20緩沖液，底物緩沖液甲為H2O2、底物緩沖液乙為3.3’，5.5’-四甲基聯(lián)苯胺和終止液為(4N?H2SO4)。

4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述親和素包被固相載體酶標板采用一下方法：用0.05M的pH值為4.5-5.0的檸檬酸緩沖液配制所需濃度的親和素包被液，將包被液加入固相載體酶標上，并洗滌、封閉，再加入生物素化的乙肝病毒PreS1單克隆抗體或抗HBS抗體進行反應(yīng)后，經(jīng)洗滌、抽濕干燥后用鋁箔袋密封。

5.如權(quán)利要求2所述方法，其特征在于，所述濃縮洗滌液配方為：含0.02MPBS、8.9％NaCl和0.5％Tween-20。