[發明專利]鏈黑菌素類似化合物及其制備方法、用途

有效

• 申請號: 201210376339.2
• 申請日: 2012-09-28
• 公開（公告）號: CN102993168A
• 公開（公告）日: 2013-03-27
• 發明（設計）人: 林雙君;鄧子新;徐飛
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: C07D401/04
• 分類號: C07D401/04;A61K31/4709;A61P35/00;A61P31/00;C12P17/16;C12R1/465
• 代理公司: 上海漢聲知識產權代理有限公司 31236
• 代理人: 郭國中;牛山

1.一種鏈黑菌素類似化合物，其特征在于，其結構式如式（Ⅰ）所示：

其中，R₁=OCH₃或H，R₂=OCH₃，R₃=OCH₃；或R₁=OCH₃，R₂=OH，R₃=OH。

2.一種如權利要求1所述的鏈黑菌素類似化合物的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

A、以鏈黑菌素原始產生菌柔毛鏈霉菌Streptomyces?flocculus?CGMCC?4.1223為出發菌株，克隆得到鏈黑菌素生物合成基因簇；

B、對所述鏈黑菌素生物合成基因簇中的羧酸酯酶基因stnA或甲基轉移酶基因stnQ3進行選擇性失活，獲得stnA基因失活突變菌株ΔstnA或stnQ3基因失活突變菌株ΔstnQ3；

C、對所述突變菌株ΔstnA進行發酵，其發酵液經分離純化，制得如權利要求1所述的鏈黑菌素類似化合物，其中，R₁=OCH₃或H，R₂=OCH₃，R₃=OCH₃；

或對所述突變菌株ΔstnQ3進行發酵，其發酵液經分離純化，制得如權利要求1所述的鏈黑菌素類似化合物，其中，R₁=OCH₃，R₂=OH，R₃=OH。

3.如權利要求2所述的鏈黑菌素類似化合物的制備方法，其特征在于，步驟C中，所述對突變菌株ΔstnA的發酵液分離提純包括：分離獲得粗提物，提純制得所述鏈黑菌素類似化合物。

4.如權利要求3所述的鏈黑菌素類似化合物的制備方法，其特征在于，所述分離獲得粗提物具體為：將滅菌后的大孔樹脂加入到突變菌株ΔstnA發酵液中，發酵培養后，分離出大孔樹脂經中等極性有機溶劑A洗脫，獲得粗提物。

5.如權利要求4所述的鏈黑菌素類似化合物的制備方法，其特征在于，所述中等極性有機溶劑A為乙酸乙酯、乙醚、氯仿、二氯甲烷或丙酮。

6.如權利要求3所述的鏈黑菌素類似化合物的制備方法，其特征在于，R₁＝OCH₃時，所述提純具體為：將粗提物用正相硅膠進行柱層析，用石油醚和中等極性有機溶劑B的混合物作為流動相洗脫，經HPLC分析檢測，收集含有R₁=OCH₃的所述鏈黑菌素類似化合物的餾分濃縮得到粗分離物A，粗分離物A經反相硅膠層析，用體積濃度為60%～70%的甲醇水溶液洗脫，經HPLC檢測后合并餾分，濃縮干燥即得。

7.如權利要求3所述的鏈黑菌素類似化合物的制備方法，其特征在于，R₁=H時，所述提純具體為：將粗提物用正相硅膠進行柱層析，用石油醚和中等極性有機溶劑B混合后作為流動相洗脫，經HPLC分析檢測，收集含有R₁=H的所述鏈黑菌素類似化合物的餾分濃縮得到粗分離物B；粗分離物B經反相硅膠層析，用體積濃度為50%～60%的甲醇水溶液洗脫，經HPLC檢測后合并餾分，濃縮干燥即得。

8.如權利要求6或7所述的鏈黑菌素類似化合物的制備方法，其特征在于，所述作為流動相的石油醚和中等極性有機溶劑B的體積比為1:3～10:1。

9.如權利要求8所述的鏈黑菌素類似化合物的制備方法，其特征在于，所述中等極性有機溶劑B為乙酸乙酯、乙醚、氯仿、二氯甲烷、丙酮或異丙醇。