[發明專利]一種浸溶油頁巖的復合菌劑及浸溶方法

無效

• 申請號: 201210376001.7
• 申請日: 2012-09-30
• 公開（公告）號: CN102965302A
• 公開（公告）日: 2013-03-13
• 發明（設計）人: 張蘭英;張學慶;任何軍;高松;安永磊
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/36;C12N1/04;C10G1/04;C12R1/07;C12R1/01
• 代理公司: 長春吉大專利代理有限責任公司 22201
• 代理人: 王立文

1.一種浸溶油頁巖的復合浸礦菌劑，其特征在于，其活性成分為膠凍樣芽孢桿菌(Bacillus?mucilaginosus)和氧化亞鐵硫桿菌(Thiobacillus?ferrooxifans)。

2.一種浸溶油頁巖中硅酸鹽的膠凍樣芽孢桿菌浸礦菌劑的篩選和馴化方法，其特征在于，包括以下步驟：

a、篩選，在某一露天具有油頁巖伴生礦的煤礦采集已經嚴重風化的油頁巖置于裝有玻璃珠和90ml蒸餾水的250ml三角瓶中，在30℃恒溫振蕩器中振蕩培養24小時，接種于含有油頁巖粉末缺鉀、氮的選擇性培養液中，再培養5天，即為油頁巖浸礦菌群A；

b、馴化，取步驟a的油頁巖浸礦菌群A混菌菌液5ml，8000rpm離心5min，用滅菌的選擇性硅酸鹽培養基洗滌2次，油頁巖浸礦菌群A接種到新鮮含有油頁巖粉末的選擇性硅酸鹽培養液中，在30℃，120rpm搖床里培養7天，重新傳代，共馴化5次；

c、馴化結束后，將所得馴化菌群平板劃線分離純化，得到1株硅酸鹽高效單菌，4℃冰箱保存。

d、經鑒定該株硅酸鹽高效單菌為：膠凍樣芽孢桿菌(Bacillus?mucilaginosus)。

步驟b中所述的：選擇性硅酸鹽培養液配方為：蔗糖10.0g，Na₂HPO₄2.0g，MgSO₄·7H₂O0.2g，NaCl0.1g，蒸餾水1000ml；

硅酸鹽培養基配方為：蔗糖10.0g，K₂HPO₄2.0g，MgSO₄·7H₂O0.2g，NaCl0.1g，酵母膏0.5g，(NH₄)₂SO₄2g，蒸餾水1000ml。

3.一種浸溶油頁巖中硅酸鹽的膠質芽孢桿菌浸礦菌劑的保存方法，其特征在于，菌種采用砂土管保存，將浸礦菌劑在含有油頁巖粉末的培養基中活化，取保藏的菌種置于100ml含有油頁巖粉末的硅酸鹽培養基的250ml搖瓶中，室溫120rpm搖床活化1-3天。

4.一種浸溶油頁巖中硅酸鹽的膠質芽孢桿菌浸礦菌液的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

e、將權利要求2中的膠質芽孢桿菌浸礦菌液接種于硅酸鹽培養基中活化，并傳代2次；

f、將活化后的膠質芽孢桿菌浸礦菌劑重新接種于新鮮的硅酸鹽培養基，振蕩培養至對數生長期；

g、將步驟f中振蕩培養至對數生長期的菌種按照5％-8％的接種量接入含有硅酸鹽菌發酵培養基的發酵罐中，發酵溫度為30℃，設定D0值為6mg/L，發酵時間為48-50h，培養至對數生長期，獲得發酵液中膠質芽孢桿菌的濃度達到10⁸/ml；?

h、將獲得的發酵液用地下水稀釋十倍后即制得浸礦用工作液，直接用于生物浸礦。

步驟g中的發酵培養基配方為：淀粉2.88g/L；麥芽糖2.08g/L；硝酸銨0.24g/L；亞硝酸鈉0.47g/L；尿素0.18g/L，用地下水配制。

5.一種浸溶油頁巖中酸溶性成分的氧化亞鐵硫桿菌浸礦菌劑的篩選和馴化，其特征在于，包括以下步驟：

①、篩選，取某一銅礦尾渣酸性廢水置于裝有90ml蒸餾水的250ml三角瓶中，在30℃恒溫振蕩器中振蕩培養24小時；接種于9K培養基中，再培養5天，即為油頁巖浸礦菌群B；

②、馴化，取步驟a的B混菌菌液5ml，8000rpm離心5min，用滅菌的9K培養基洗滌2次，油頁巖浸礦菌群B接種9K培養基中，在30℃，120rpm搖床里培養7d，重新傳代，共馴化5次；

③、馴化結束后，將所得馴化菌群平板劃線分離純化，各得到1株高效浸礦產酸單菌，4℃冰箱保存；

④、經鑒定該株高效浸礦產酸菌為：氧化亞鐵硫桿菌Thiobacillus?ferrooxidans。

6.一種浸溶油頁巖中酸溶性成分的氧化亞鐵硫桿菌浸礦菌劑的保存方法，其特征在于，菌種采用砂土管保存，取保藏的菌種置于100ml9K培養基的250ml搖瓶中，室溫120rpm搖床活化1-3天。