[發(fā)明專利]鐵皮石斛在非無菌條件下無糖微體快繁技術(shù)

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210374262.5
• 申請(qǐng)日: 2012-10-08
• 公開（公告）號(hào): CN102835318A
• 公開（公告）日: 2012-12-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 荊樹漢
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 荊樹漢
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明為生物科技領(lǐng)域的快繁技術(shù)，涉及名貴藥材鐵皮石斛在非無菌條件下快速繁殖的方法。

技術(shù)背景

石斛是我國(guó)常用中藥，我國(guó)藥典2010年版一部已把鐵皮石斛單列為一個(gè)品種收藏，因此呈現(xiàn)出其功效或價(jià)值比一般石斛更珍貴的獨(dú)特療效，鐵皮石斛Dendrobium?0fficinale?Kimura?Et?Migo具有滋陰清熱、益胃生津、潤(rùn)肺止咳等功效，常用于熱病傷津，口干煩渴、病后虛熱等多種病癥。因森林生態(tài)破壞與資源過度開采，野生資源頻臨枯竭，1987年國(guó)務(wù)院將其列為國(guó)家重點(diǎn)保護(hù)植物。

為了實(shí)現(xiàn)鐵皮石斛資源的可持續(xù)發(fā)展，科研人員自20世紀(jì)70年代開始了人工栽培技術(shù)的研究工作，直到新世紀(jì)，新種子生產(chǎn)、組織培養(yǎng)和設(shè)施栽培等人工繁育關(guān)鍵技術(shù)才得以突破，并迅速推廣應(yīng)用。

現(xiàn)有的鐵皮石斛組培技術(shù)。從種子的萌發(fā)、原球莖及種苗的誘導(dǎo)，種子的生根、再到種苗的增殖及壯苗培養(yǎng)，其時(shí)間周期要9-12個(gè)月，其整個(gè)周期長(zhǎng)，耗能大，人工成本高。本發(fā)明使用的培養(yǎng)快繁技術(shù)，包括開始的種子無菌萌發(fā)，原球莖及種子的誘導(dǎo)和培養(yǎng)，直到小苗形成后，開始在非無菌條件下繼代快繁，具有出苗時(shí)間快，節(jié)約能源和成本，所培育出的壯苗葉大莖粗的優(yōu)質(zhì)苗，本發(fā)明在近自然的條件下進(jìn)行可明顯提高其成活率。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種鐵皮石斛在非無菌條件下的繁殖技術(shù)，該方法成本低，操作簡(jiǎn)便，節(jié)省能源和人力成本，較好的解決了目前存在鐵皮石斛組織培養(yǎng)過程成本高，組培周期長(zhǎng)的問題。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了以下技術(shù)方案：

1、種子的無菌萌發(fā)

采摘鐵皮石斛的果實(shí)進(jìn)行表面消毒處理，將種子播種常規(guī)石斛無菌萌發(fā)培養(yǎng)基上誘導(dǎo)種子無菌萌發(fā)

2、原球莖及其種苗的誘導(dǎo)和培養(yǎng)

播種后的培養(yǎng)瓶置于原球莖及種幼苗誘導(dǎo)條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：溫度10-30℃，光照為自然光或日光燈500-1500Lux，種子萌發(fā)形成原球莖和種苗

3、也可將無菌苗繼續(xù)生根

根據(jù)需要將上述條件下培養(yǎng)的種苗轉(zhuǎn)移到誘導(dǎo)生根的條件下培養(yǎng)以獲得大量形狀優(yōu)良的無菌苗，誘導(dǎo)生根的培養(yǎng)條件為：自然光、日光燈、led燈沒日光照12-14小時(shí)，光照強(qiáng)度為300-4000Lux，培養(yǎng)溫度為20-35℃

鐵皮石斛在非無菌條件下無糖微體繁殖

無根或有根的無菌苗洗去培養(yǎng)基晾干待用

將松樹皮自然曬干后打成粗粉(20目)備用

可用1/2MS、MS、N6、CHB、B5等培養(yǎng)基，他們中的成分除不加蔗糖、瓊脂、維生素，其他的無機(jī)物和有機(jī)物均要

激素

同時(shí)加在培養(yǎng)基液體中，包括NAA及6BA，NAA的濃度為0.1mg/L-2mg/L，6BA0.2mg/L-2mg/L。

配置培養(yǎng)基

其固體基質(zhì)如松樹皮粗粉加培養(yǎng)基液體如1/2MS(含激素)的比例為1∶2-5，以混勻后手抓成團(tuán)，一壓即散，不宜含過多的水份，一般以1：2.5-3.5為好，配置好的培養(yǎng)基備用。

裝并或托盤

并子或托盤適當(dāng)用消毒劑如1/2000高錳酸鉀溶液或1/1000的新潔而滅，擦洗消毒完后可裝入備用的培養(yǎng)基。

實(shí)施環(huán)境

是在密閉的容器(包括各種大小的容器、框架)或房間等，在生產(chǎn)中應(yīng)用大型容器或房間為宜

非無菌條件的快速繁殖

將無菌條件下的培養(yǎng)成的幼苗(有2張葉以上)，用常水小心洗去培養(yǎng)基后，晾干即可種入已裝有培養(yǎng)基的容器內(nèi)，并將上述種好苗的容器(并子或托盤)，放置在密封的環(huán)境中，并開始通入二氧化碳?xì)怏w，二氧化碳的濃度為0.1％-20％，其中以0.5％-5％為好，光照開始5天為3000Lux，5-10天為5000Lux，10天后8000Lux以上，但不超過20000Lux，每天光照12h-14h，密封環(huán)境內(nèi)的溫度20℃-36℃，相對(duì)濕度60％-90％，在上述條件下培養(yǎng)50-80天，待苗有5片以上，莖有3mm-5mm以上粗即為大苗。

培養(yǎng)出的大苗的馴化

將在CO2培養(yǎng)器(室)形成上述大苗取出后放置在有遮陰和自然溫度條件下，放置10-15天，保持通風(fēng)、遮陽，適當(dāng)淋水，到時(shí)即可出苗移栽。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

下面用實(shí)施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容。但本發(fā)明的內(nèi)容并不僅僅局限于此。