[發明專利]Graves病基因無創檢測試劑盒（TSHR等基因）

無效

• 申請號: 201210373800.9
• 申請日: 2012-10-02
• 公開（公告）號: CN103710424A
• 公開（公告）日: 2014-04-09
• 發明（設計）人: 石慧林
• 申請（專利權）人: 解碼(上海)生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于分子生物學領域，涉及醫學和生物技術，具體涉及一種Graves病的基因檢測試劑盒，根據檢測結果從基因層面評估Graves病發生的風險級別，并且指導Graves病高危人群提早預防和治療。?

背景技術

Graves病(GD)是一種伴有甲狀腺激素增多的器官特異性自身免疫性疾病，它的發生具有一定的遺傳因素。以促甲狀腺素受體抗體(TRAb)陽性、高甲狀腺素血癥、Graves眼病、彌漫性甲狀腺腫和脛前黏液性水腫為特征。Graves病的發生呈明顯的家族聚集性，患者家族成員的患病風險為正常人群的15倍，而且同卵雙生子的患病一致率顯著高于異卵雙生子。大量的流行病學研究為其遺傳易感提供了確鑿的證據。單核苷酸多態性(Single?Nucleotide?Polymorphism，SNP)指的是基因組序列上的單個堿基突變。作為第三代遺傳學標記，SNP在疾病易感基因的研究中有著重要的意義。通過分子診斷檢測與Graves病發生密切相關的基因位點就可以提前評估受檢者患Graves病的風險，從而提早預防和治療。

細胞毒性T淋巴細胞相關抗原4（Cytotoxic?T?Lymphocyte?Associated?Antigen?4，CTLA-4）是一種免疫調節分子。近年的研究表明：CTLA-4基因多態性與多種自身免疫性疾病的發生風險相關。CTLA-4基因上外顯子1第17密碼子49位點A/G多態性造成CTLA-4信號肽中編碼氨基酸的改變，從而影響蛋白翻譯后加工、修飾，使sCTLA-4功能發生變化。研究發現GD?患者等位基因G/G和G基因頻率在GD組均較對照組顯著增加，提示CTLA-4?G49可能是GD的易感因素,?CTLA-4基因可能是GD的易感候選基因。

促甲狀腺素受體(TSHR)?基因能夠編碼一種特異的蛋白質TSHR，表達在甲狀腺濾泡細胞表面，調節甲狀腺的增殖分化和甲狀腺激素的合成。在Graves病中TSHR基因區域的遺傳變異可能通過改變正常TSHR的結構、表達量以及翻譯后過程，引起機體針對TSHR的自身免疫反應。今年來，大樣本的研究已經明確了TSHR基因和Graves病的發生密切相關，其中最值得關注的區域定位于TSHR基因內含子l上。對1000多例Graves病患者和1000多名健康對照者進行TSHR?rsl79247基因分型，得到3種基因型：AA、AG、GG，其中病例組AA基因型頻率和A等位基因明顯高于對照組。提示TSHR?rsl79247是Graves病的獨立易感位點。

FcRL3基因包含16個外顯子，在淋巴細胞聚集區如成熟B細胞中高表達。近年來的國內外研究數據顯示，FcRL3基因多態位點不但與GD相關，還與多發性硬化、系統性紅斑狼瘡和類風濕性關節炎等多種自身免疫性疾病相關。研究發現FcRL3基因啟動子rs7528684位點存在A／G多態性，而且GD病患組的GG基因型和G等位基因頻率均明顯高于正常對照組。提示FcRL3基因可能是GD等自身免疫性疾病的遺傳標志之一。

因此，建立簡單、快速的Graves病易感基因無創檢測方法，能夠檢測出Graves病發生相關的基因單核苷酸位點基因型，及時篩查出易患Graves病的高危人群，有針對性的進行孕期檢測和指導，對于降低人群得病率、保障大眾的安全健康具有非常重要的意義。

發明內容

基于CTLA-4基因上A49G(rs231775)、TSHR基因上rs179247、FcRL3基因上rs7528684的3個單核苷酸多態性位點基因型可用來評估Graves病發病風險級別，本發明提供一種Graves病基因無創檢測試劑盒。

該試劑盒包括：

檢測CTLA-4基因上A49G(rs231775)、TSHR基因上rs179247、FcRL3基因上rs7528684的3個單核苷酸多態性位點基因型的特異性引物對及DNA測序引物；

PCR反應組件（包括Taq酶、dNTP混合液、反應緩沖液、ddH2O等）；

PCR產物純化組件（包括SAP酶、ExoI酶、ddH2O等）；

DNA測序反應組件（包括BigDye?mix，EDTA溶液、100%乙醇溶液、70%乙醇溶液、HIDI溶液、ddH2O等）。

本發明試劑盒的組分和含量包括：

PCR反應體系：10×PCR反應緩沖液?2.5ul；25mM?dNTP混合液0.2ul；5U/ul?Taq?DNA聚合酶0.125ul；20uM特異性引物對（每條引物各0.25ul）；ddH2O?19.175ul；