[發(fā)明專利]一種具有表面拉曼增強(qiáng)活性的納米星二聚體的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210373299.6
• 申請(qǐng)日: 2012-09-27
• 公開（公告）號(hào): CN102875626A
• 公開（公告）日: 2013-01-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 胥傳來(lái);孫茂忠;王利兵;馬偉;匡華;徐麗廣;趙媛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號(hào): C07H21/04
• 分類號(hào): C07H21/04;C07H1/00
• 代理公司: 無(wú)錫市大為專利商標(biāo)事務(wù)所 32104
• 代理人: 時(shí)旭丹;劉品超

1.一種具有表面拉曼增強(qiáng)活性的納米星二聚體的制備方法，包括金種合成，金納米星合成，金納米星分別修飾DNA1、DNA2，金納米星修飾拉曼信標(biāo)分子，兩種修飾后的金納米星的組裝及表征，所合成的金納米星為等離子共振體，通過(guò)互補(bǔ)DNA鏈的偶聯(lián)，形成金納米星二聚體結(jié)構(gòu)；工藝步驟：

（1）金種合成

采用檸檬酸三鈉還原氯金酸合成金種：潔凈的三角燒瓶中加入48.75mL的Milli-Q?超純水，而后向水中加入1.25mL的濃度為4g/L的氯金酸，加熱，煮沸，緊接著加入1.2mL質(zhì)量濃度1%的檸檬酸三鈉溶液，邊加熱邊攪拌，溶液顏色從淡黃色變成紅色，反應(yīng)持續(xù)6-8min以使檸檬酸三鈉完全沉降，冷卻至室溫后，向溶液中加入0.3g聚乙烯吡咯烷酮，攪拌過(guò)夜使其充分包裹在金納米粒子上，最后將該溶液以6000rpm離心40min，去上清，沉淀重懸于4mL乙醇中，即為金種溶液；

（2）金納米星粒子的合成

采用種子生長(zhǎng)法合成金納米星：準(zhǔn)確稱取1.5g分子量10000的聚乙烯吡咯烷酮于潔凈的三角燒瓶中，接著加入N,N-二甲基甲酰胺15mL，磁力攪拌30min使聚乙烯吡咯烷酮完全溶解，然后向溶液中加入0.082mL濃度為20g/L氯金酸，磁力攪拌8min后，立即加入0.05mL由步驟（1）制備的金種溶液，攪拌20min即可制得金納米星；

（3）金納米星與DNA1、DNA2偶聯(lián)

步驟（2）合成出的金納米星粒子分別與巰基修飾的DNA1、DNA2進(jìn)行偶聯(lián)形成AuNS-DNA1、AuNS-DNA2復(fù)合體；工藝為：

將步驟（2）中制備的10mL金納米星9000rpm離心10min，濃縮至0.5mL，加入0.5mL含0.01M的SDS和0.05M?NaCl的0.5×TBE溶液，混勻后4℃保藏，待用；

取制備好的金納米星的TBE溶液2份，每份各100μL，分別加入2μL?100μM的DNA1和100μM的DNA2，混勻，室溫振搖反應(yīng)12h；

將各反應(yīng)溶液在8000rpm離心5min，棄上清，沉淀用50μL的含0.01M的SDS和0.05M?NaCl的0.5×TBE溶液分散沉淀，分別制得AuNS-?DNA1與AuNS-?DNA2復(fù)合體，4℃保藏、待用；

（4）金納米星修飾拉曼信標(biāo)分子

采用步驟（3）修飾好的AuNS-?DNA1與AuNS-?DNA2復(fù)合體分別和拉曼信標(biāo)分子4-氨基苯硫酚4-ATP進(jìn)行偶聯(lián)，制得AuNS-?DNA1-ATP與AuNS-?DNA2-ATP復(fù)合體；

（5）金納米星二聚體組裝及表征

將步驟（4）制備出的AuNS-?DNA1-ATP與AuNS-?DNA2-ATP復(fù)合體進(jìn)行雜交，形成組裝結(jié)構(gòu)，并對(duì)此結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征：取步驟（4）中偶聯(lián)好的金納米星：AuNS-?DNA1-ATP與AuNS-?DNA2-ATP復(fù)合體各20μL，加入20μL含0.01M的SDS和0.05M?NaCl的0.5×TBE溶液，振蕩反應(yīng)12?h；即制得金納米星二聚體；

DNA1：5’-TAGGAATAGTTATAAAAAAAAAAAA-3’，

DNA2：5’-TTATAACTATTCCTAAAAAAAAAAA-3’。