[發明專利]一種檢測咖啡中高級脂肪酸的方法

有效

• 申請號: 201210370560.7
• 申請日: 2012-09-29
• 公開（公告）號: CN102879512A
• 公開（公告）日: 2013-01-16
• 發明（設計）人: 韓敬美;趙偉;王昆淼;何沛;劉春波;劉志華;陳永寬;繆明明
• 申請（專利權）人: 云南煙草科學研究院
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/06
• 代理公司: 昆明正原專利商標代理有限公司 53100
• 代理人: 金耀生

技術領域

本發明涉及咖啡檢測技術領域，具體是一種檢測分析咖啡中6種高級脂肪酸的方法及應用。

背景技術

隨著現代社會的快速發展，人們越來越多的投入到工作學習中，而咖啡作為世界上的三大飲料之一也漸漸成為很多大城市上班族提神醒腦和休閑約會的必須品。眾所周知，咖啡中的咖啡因會刺激大腦皮質、消除睡意，增強感覺和思考力，具有提神醒腦的作用。此外，咖啡還可以防止糖尿病，防止腫癌，降低炎癥和心血管疾病的發生率。這些醫療功效逐漸得到人們的重視和研究，目前咖啡中的一些營養化學成分的分析已有一些報道。但是，咖啡中與兒童生長發育和成長健康有關，具有降血脂、防治冠心病等治療作用，且與智力發育、記憶等生理功能有一定聯系的高級脂肪酸，卻未得到人們的普遍關注。因此有效檢測咖啡中的高級脂肪酸十分重要。蒸發光散射檢測器是一種基于不揮發的樣品顆粒對光的散射程度與其質量成正比進行檢測的質量檢測器。該檢測方法消除了常見于LC檢測方法中的難點，其響應不依賴與樣品的光學特性，任何揮發性低于流動性的樣品均能被檢測，不受其官能團的影響，具有穩定性好，靈敏度高等特點。超高效液相色譜是借助于高效液相色譜的理論及原理，涵蓋了小顆粒填料，非常低的系統體積及快速檢測手段等全新技術，增加了分析的通量，靈敏度及色譜峰容量。目前，利用超高效液相色譜-蒸發光散射檢測器檢測咖啡中的硬脂酸、棕櫚酸、油酸、亞麻酸、亞油酸、肉豆蔻酸等高級脂肪酸并無報道。

發明內容

本發明的目的是提供一種檢測分析咖啡中6種高級脂肪酸的方法及其應用?？梢詫Х戎杏坞x態、以結合態形式存在的高級脂肪酸進行準確、快速、全面的定量分析。

發明解決技術問題的技術方案是：優化超高效液相色譜-蒸發光散射檢測器分析檢測高級脂肪酸的色譜條件，并在不同的皂化溫度、氫氧化鉀濃度、不同的皂化時間、不同的萃取溶劑和不同的萃取劑體積條件下進行正交優化試驗，以得到不同濃度的高級脂肪酸的樣品溶液，通過超高效液相色譜-蒸發光散射檢測器分析檢測，最后得到了檢測咖啡中高級脂肪酸的最佳皂化條件和分析方法。具體方法如下：

1）制備6種高級脂肪酸的標準溶液：

（1）分別稱取20-30、20-40、20-40、20-30、10-20、20-30?mg的亞麻酸、亞油酸、棕櫚酸、油酸、肉豆蔻酸和硬脂酸，置于同一50?mL?容量瓶中，加少許甲醇超聲溶解后取出，冷卻至室溫，用甲醇定容至50?mL，配制成標準儲備液；用10?mL的容量瓶分別將標準儲備液稀釋2-10倍，用甲醇定容10?mL，得到不同濃度的高級脂肪酸標準工作液，搖勻備用；

（2）在超高效液相色譜儀的C18分析柱上，以乙酸水溶液-乙腈為流動相梯度洗脫游離高級脂肪酸；色譜條件如下：

分析柱：C₁₈柱，100?mm×2.3?mm?i.d.,1.7?um

流動相：流動相A為體積比為1-2%乙酸水溶液，流動相B為乙腈；

洗脫方式：梯度洗脫

檢測器條件：蒸發光散射檢測器的漂移管溫度：50-80?℃；蒸發光散射檢測器的載氣：氮氣（純度＞99.9％），流速為2.89-4.5?L/min；氣體壓力：40.0-60?psi；噴霧器模式：冷卻；增益值：400-800；

（3）按照濃度由低到高分別對高級脂肪酸標準工作液進行超高效液相色譜-蒸發光散射器測定，并將測得的峰面積y與標準溶液的質量濃度x?mg/L進行Log-Log線性回歸分析，得到6種高級脂肪酸的標準曲線方程，?log(y)=a×log(x)+b，其中a為標準曲線方程中一次方系數，b為標準曲線方程中零次項系數；

2）咖啡樣品的制備：將磨碎至40-60目的咖啡樣品0.0500g-0.1000g置于100-150?mL圓底燒瓶中，加入40-80?mL?濃度為2-?4mol/L的KOH-甲醇溶液，于40-70℃水浴中回流皂化20-80?min，冷卻至室溫，過濾至具塞三角錐形瓶中，加入10-30?mL蒸餾水，混勻，用質量分數濃度20-36％鹽酸調節濾液的pH<7，用10-20mL二氯甲烷萃取3次，合并3次的二氯甲烷層，用15-40?mL蒸餾水洗滌二氯甲烷層，二氯甲烷層用氮吹自動濃縮儀蒸干，殘余物用甲醇溶解并定容至5-15?mL，用0.22?μm微孔有機濾膜過濾，取濾液進行超高效液相色譜-蒸發光散射器測定，得到試樣中高級脂肪酸的峰面積A_試樣；

3）用外標法定量分析計算

[lgA_試樣-b]/a=?lg?C_試樣