[發明專利]檢測殘留苯乙醇胺A的酶聯免疫試劑盒及其使用方法

有效

• 申請號: 201210368968.0
• 申請日: 2012-09-27
• 公開（公告）號: CN102901813A
• 公開（公告）日: 2013-01-30
• 發明（設計）人: 杜道林;洪霞;張禎;薛永來
• 申請（專利權）人: 江蘇維賽科技生物發展有限公司
• 主分類號: G01N33/544
• 分類號: G01N33/544;G01N21/31
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 樓高潮

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技術領域

本發明公開了一種檢測動物組織及其代謝物中苯乙醇胺A的酶聯免疫試劑盒及其檢測方法，屬于酶聯免疫吸附分析方法(Enzyme-Linked?Immunosorbent?Assay，ELISA?)技術領域。本發明涉及用于檢測動物源食品、血液及尿液中殘留的苯乙醇胺A的含量的酶聯免疫試劑盒及使用該試劑盒的檢測方法。

背景技術

苯乙醇胺A(Phenylethylamine，PEA)又稱為克倫巴胺，學名為2-[4-（4-硝基苯基）丁基-2-基氨基]-1-甲氧基苯乙醇，是一種人工合成的化學物質。化學結構式如下：

克倫巴胺是福莫特羅的同分異構體，是合成萊克多巴胺的副產物，具有同瘦肉精和萊克多巴胺相同的作用和效果，屬于β-激動劑的一種，具有營養再分配作用。

與其他瘦肉精品種如萊克多巴胺等相比，同樣可以作為添加劑用于刺激動物生長，加強蛋白質在動物體內沉積，提高基礎代謝水平，使體脂趨于分解，促進豬生長速度加快、皮紅毛亮、瘦肉率高。人食用含這種瘦肉精的豬肉后，會出現惡心、頭暈、四肢無力、手顫等中毒癥狀，特別是對心臟病、高血壓患者危害更大。長期食用則有可能導致染色體畸變，誘發惡性腫瘤。

苯乙醇胺A被農業部第1519號公告列為“禁止在飼料和動物飲水中使用的物質”，最早是在四川省被檢測出來的—2010年9月四川省廣安市廣安區棗山鎮畜牧獸醫站對某養豬場例行違禁藥物監測中，用萊克多巴胺測試卡分別檢測母豬、仔豬和育肥豬尿液，發現該場育肥豬尿檢呈陽性，之后確認是新型添加物苯乙醇胺A，12月農業部發布了第1519號公告，禁止了這一化學品的使用。

現有技術對于苯乙醇胺A的檢測主要是高效液相色譜-串聯質譜法、高效液相色譜法等檢測方法，但這些方法的檢測過程繁瑣、檢測時間長，需要的設備昂貴，操作復雜，難于推廣。根據我國目前已經形成的一套獸藥殘留監控檢測技術，ELISA作為一種準確、靈敏性、高性價比的檢測方法，是食品安全監測、獸藥殘留監測領域進行篩選的理想方法。本發明通過特有的免疫動物制備具有高親和力、高特異性的苯乙醇胺A抗體，建立一種可以檢測苯乙醇胺A的間接競爭ELISA檢測方法。本方法具有操作簡便、快捷，靈敏度高、特異性好等特點。

發明內容

本發明所要解決的技術問題：提供一種能夠快速且準確的檢測出殘留苯乙醇胺A的酶聯免疫試劑盒。本發明所要解決的另一個技術問題是提供以一種操作簡單、耗時短、檢測靈敏度高且適用于大批量樣品檢測的檢測殘留苯乙醇胺A的方法。

為解決所述技術問題，經過大量實驗研究分析，本發明提供了以下技術方案來解決所述技術問題：

一種檢測殘留苯乙醇胺A的酶聯免疫試劑盒，包括酶標板96孔、苯乙醇胺A標準品工作液各1?mL、苯乙醇胺A抗體工作液7?mL、苯乙醇胺A酶標二抗工作液12?mL、底物液12?mL、終止液7?mL、濃縮洗滌液40?mL和濃縮樣品稀釋液40?mL；

????其中，所述酶標板是包被苯乙醇胺A抗原的酶標板，苯乙醇胺A抗原是用0.05?mol/L?pH?9.6的碳酸鹽包被緩沖液(CBS)稀釋成1:8000比例，100微

L/孔，37℃，2h，取出4℃放置過夜；取出酶標板甩掉板內液體，用稀釋后的濃縮洗滌液300微

L/孔，洗板3次，1min/次；然后加入0.5%?BSA封閉，150微

L/孔，37℃放置2?h；取出酶標板甩掉板內液體，用潔凈的毛巾包裹后拍干板內殘留液體；將拍干后的酶標板整齊地擺放置GMP車間恒溫（25℃）晾干；抽檢要求板內孔與孔之間，板間的OD值變異系數均小于10%；檢驗合格后將酶標板密封后置4℃下保存。

????其中，所述苯乙醇胺A標準品的濃度分別為0?ng/mL、0.1?ng/mL、0.3?ng/mL、0.9?ng/mL、2.7?ng/mL、8.1?ng/mL。

????其中，所述苯乙醇胺A抗體工作液是用抗體稀釋液稀釋成1:10000比例；

所述苯乙醇胺A酶標二抗工作液是用酶標二抗稀釋液稀釋成1:2000比例；