[發(fā)明專利]一種精子頂體區(qū)拉曼光譜峰及其用途

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210368194.1
• 申請(qǐng)日: 2012-09-28
• 公開（公告）號(hào): CN103698310A
• 公開（公告）日: 2014-04-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李錚;朱勇;劉鋒;何琳;劉宇飛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院
• 主分類號(hào): G01N21/65
• 分類號(hào): G01N21/65
• 代理公司: 上海卓陽(yáng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31262
• 代理人: 巫蓓麗

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及精子受精功能檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，是一種精子頂體區(qū)拉曼光譜峰及其在檢測(cè)精子受精功能中的用途。

背景技術(shù)

精子受精功能的評(píng)估和檢測(cè)是男性不育診斷與治療、建立男性避孕技術(shù)與珍稀動(dòng)物的人工育種、經(jīng)濟(jì)動(dòng)物的優(yōu)良種培育的重要手段。深入研究人類精子結(jié)構(gòu)與功能，對(duì)探索精子發(fā)生之謎、出生健康子代意義重大。

精子為生命體中重要的生物分子。精子由包含在細(xì)胞膜內(nèi)的有機(jī)物、無(wú)機(jī)物和生物化學(xué)物質(zhì)的復(fù)雜混合體組成，包括核酸、蛋白質(zhì)、多糖和液體。活動(dòng)的精子內(nèi)生物分子的組成和結(jié)構(gòu)可能隨生理狀態(tài)的改變而改變。然而，直接分析精子細(xì)胞內(nèi)單個(gè)小分子物質(zhì)與化學(xué)基團(tuán)十分困難且極具挑戰(zhàn)。因?yàn)檫@些分子或基團(tuán)由于布朗運(yùn)動(dòng)而進(jìn)行著不斷的隨機(jī)運(yùn)動(dòng)。但目前的精子DNA分析方法是不穩(wěn)定的，因?yàn)樗荒茏R(shí)別精子固有的分子異常。現(xiàn)有的精子功能檢測(cè)多采用化學(xué)染色等方法，例如彗星法、精子染色質(zhì)擴(kuò)散法（SCD）及丫啶橙流式細(xì)胞儀分析法等都是使用熒光染料對(duì)精子進(jìn)行染色，該種方法對(duì)精子的損傷是不可修復(fù)的，也無(wú)法直接進(jìn)行后續(xù)的輔助生殖治療。

隨著計(jì)算機(jī)及其在圖像數(shù)字處理技術(shù)方面的進(jìn)展，一門嶄新、非侵入性、快速而靈敏的光譜學(xué)檢測(cè)方法——激光拉曼（Raman）光譜技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用日漸廣泛，被逐步應(yīng)用于各種細(xì)胞分類和鑒別研究工作中。經(jīng)拉曼掃描不僅可以觀察細(xì)胞形貌，而且還能檢測(cè)出表征細(xì)胞形態(tài)的峰譜，它包含了單純形貌觀察得不到的更豐富的信息，通過這些信息反映出細(xì)胞的物質(zhì)成分和結(jié)構(gòu)的變化，這在生物遺傳及臨床醫(yī)學(xué)等學(xué)科的研究進(jìn)程中有潛在的應(yīng)用價(jià)值。

拉曼光譜的分析方法具備以下優(yōu)點(diǎn)：不需要對(duì)樣品進(jìn)行前處理，也沒有樣品的制備過程，避免了一些誤差的產(chǎn)生，并且在分析過程中操作簡(jiǎn)便，測(cè)定時(shí)間短，靈敏度高。

目前還未見有人報(bào)道拉曼光譜技術(shù)在正常、具有受精潛能的精子篩選中的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種精子頂體區(qū)拉曼光譜峰；提供一種上述精子頂體區(qū)拉曼光譜峰的用途；提供一種精子受精功能評(píng)估方法。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：

一種精子頂體區(qū)拉曼光譜峰，所述的精子頂體區(qū)拉曼光譜峰橫坐標(biāo)為波長(zhǎng)，單位nm；縱坐標(biāo)為強(qiáng)度，單位a.u；有六條特征峰，波長(zhǎng)分別為：520-540nm、810-900nm、1000-1100nm、2300-2400nm、3200-3500nm，對(duì)應(yīng)強(qiáng)度分布分別為：500-600a.u，100-200a.u，200-250a.u，100-200a.u，400-600a.u。

如上所述的精子頂體區(qū)拉曼光譜峰在非治療目的的精子受精功能評(píng)估和檢測(cè)中的應(yīng)用。

如上所述的精子頂體區(qū)拉曼光譜峰在非治療目的的人類精子受精功能評(píng)估和檢測(cè)中的應(yīng)用。

如上所述的精子頂體區(qū)拉曼光譜峰在精子理論研究中的應(yīng)用。

為實(shí)現(xiàn)上述第二個(gè)目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：

一種精子受精功能評(píng)估方法，所述的方法包括下列步驟：

a）精子洗滌純化，制備精液涂片；

b）在激光激發(fā)波為532nm，激光功率5mW掃描精液涂片上的單個(gè)精子頂體區(qū)至少三次，獲得一個(gè)拉曼數(shù)據(jù)譜峰；

c）將步驟b）得到的拉曼數(shù)據(jù)譜峰與上述精子頂體區(qū)拉曼光譜峰進(jìn)行對(duì)比，判斷精子是否具備受精功能。

步驟c）所述的判斷精子是否具備受精功能是觀察步驟b）得到的拉曼數(shù)據(jù)譜峰的520-540nm特征峰對(duì)應(yīng)強(qiáng)度分布是否在500-600a.u，810-900nm特征峰對(duì)應(yīng)強(qiáng)度分布是否在100-200a.u，3200-3500nm特征峰對(duì)應(yīng)強(qiáng)度分布是否在400-600a.u，如果是，則判斷該受試精子具備受精潛能，相反則不具受精潛能。

本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于：

本發(fā)明提供了判定精子受精潛能的標(biāo)準(zhǔn)拉曼光譜峰，其判定結(jié)果準(zhǔn)確可靠、可信度高，因此，本發(fā)明為精子受精潛能的檢測(cè)提供了一種新方法，該方法可對(duì)單個(gè)精子進(jìn)行操控和光譜收集，受試精子無(wú)須特殊處理，可被直接放置在載玻片上方位置，減小了玻片的熒光干擾，通過激光強(qiáng)度的控制和激光波長(zhǎng)的選擇使精子的損傷被控制在一極低的程度，可直接用于后續(xù)的研究或輔助生殖治療，彌補(bǔ)了現(xiàn)有技術(shù)中精子功能研究方法的缺陷。

附圖說(shuō)明

附圖1是實(shí)驗(yàn)組精子頂體區(qū)的拉曼光譜峰。

附圖2是對(duì)照組精子頂體區(qū)的拉曼光譜峰。

附圖3是實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組精子頂體區(qū)的拉曼光譜峰對(duì)比圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明提供的具體實(shí)施方式作詳細(xì)說(shuō)明。