[發明專利]一種人體液HSP70膠體金標檢測試紙條及其制備方法無效

申請號：	201210365240.2	申請日：	2012-09-26
公開（公告）號：	CN102890156A	公開（公告）日：	2013-01-23
發明（設計）人：	錢令嘉;弓景波;王新興;戰銳;杲修杰	申請（專利權）人：	中國人民解放軍軍事醫學科學院基礎醫學研究所
主分類號：	G01N33/68	分類號：	G01N33/68;G01N33/532
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種人體 hsp70 膠體檢測試紙及其制備方法
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【說明書】：

技術領域

本發明屬于免疫學分析技術領域，具體涉及一種人體液中HSP70膠體金標檢測試紙條及制備方法。

背景技術

熱休克蛋白家族(HSPs)是一類高度保守的蛋白，熱休克蛋白70（heat?shock?protein?70,?HSP70）是熱休克蛋白家族中的重要成員，其分為誘導型的組成型的。當機體受到外界環境中多種不良因素刺激時，誘導型的HSP70蛋白表達升高。HSP70蛋白對細胞損傷的修復、存活和維持正常的細胞功能是必需的。在環境刺激、病原菌感染、疾病引起細胞應激損傷中發揮分子伴侶作用，阻止蛋白聚集，促進損傷蛋白的重新折疊。在大多數的哺乳動物，只有在應激條件下誘導型HSP70表達，而且顯著的細胞和機體應激后才能檢測到，但是在人和靈長類，誘導型的HSP70有一個基準值，在一些特殊條件下如過熱、化學有毒物質暴露、缺氧、缺體、感染、自身免疫性疾病、凋亡、器官移植、細菌和病毒引起的感染，動脈粥樣硬化等心體管疾病中，生物體的HSP70表達顯著升高；在正常老化過程，精子發生，月經，運動練習等正常生理過程中，生物體的HSP70表達也顯著升高，提示其在這些過程中可能發揮重要作用。

酶聯免疫吸附分析（enzyme?linked?immμnosorbent?assay，ELISA）技術是目前進行體液生物蛋白檢測最為常用的方法，與其他檢測方法相比，ELISA檢測方法具有成本低、檢測設施設備簡單、快速高效的特點，并在不斷改進當中，已經有直接ELISA、間接ELISA、單抗體ELISA，微波ELISA、雙抗體夾心ELISA方法。但是ELISA方法，目前只適用于實驗室檢測，不能適用于現場檢測。

應激是機體在對生存環境中多種不利因素適應過程中,?實際或認知上的要求與適應和應付能力之間不平衡導致的身心緊張狀態及其反應。應激同人的健康有密切聯系，這種聯系是雙向的：一方面應激可影響人的健康，另一方面一個人的健康狀況也會影響應激條件下心理應激反應的強度和對應激的耐受力。適度的心理應激是人成長和發展的必要條件，適當的應激有助于維持人的生理、心理和社會功能，應對挑戰既可以引起我們的緊張、勞累、苦惱和痛苦，又可以為我們帶來成功的喜悅、輕松和歡樂。但是長期、超過人適應和應對能力的應激就會損害人的健康，這是心理應激對健康的消極影響，主要表現在下述三個方面。

首先，心理應激引起的心理和生理反應可以以癥狀和體征的形式見之于臨床，成為人們身體不適、虛弱和精神痛苦的根源和就醫需求幫助的原因；其次，心理應激可以加重已有的精神障礙和軀體疾病，或使這些疾病復發；最后，心理應激可以造成對疾病的易感狀態，并且在其他因素的共同作用下導致新的精神障礙和軀體疾病。

隨著研究的深入，?HSP70作為應激的生物標記物，可以檢測機體應激水平，預防應激損傷的發生，用于機體應激負荷健康風險評估。

發明內容

本發明的目的是克服現有檢測HSP70技術的不足，提供一種人體液HSP70膠體金檢測試紙條。

本發明的目的還在于提供上述檢測試紙條的制備方法。

一種人體液HSP70膠體金標檢測試紙條，此試紙條由設在固定板1上依次相連的樣品墊2、金標墊3、硝酸纖維素膜4和吸水紙9組成；在硝酸纖維素膜4上設有第一檢測線5、第二檢測線6和第三檢測線7和一條質控線8；在金標墊3上設有金標抗體。

固定板1為具有壓敏膠的PVC板，樣品墊2為玻璃纖維膜，金標墊3為聚酯纖維膜。

金標抗體為顯色抗體，檢測線為捕捉抗體，顯色抗體與捕捉抗體為1對雙抗體夾心配對的鼠抗人HSP70單克隆抗體。

金標抗體用粒徑為20nm-60nm的膠體金顆粒標記。

質控線8為羊抗鼠免疫球蛋白G（immunoglobulin?G，IgG）。

上述人體液HSP70膠體金標檢測試紙條的制備方法，包括以下步驟：

（1）用常規的檸檬酸三鈉還原法制備均勻粒徑為20nm-60nm的膠體金；