[發明專利]一種人血液HSP70抗體膠體金標檢測試紙條及其制備方法

無效

• 申請號: 201210365239.X
• 申請日: 2012-09-26
• 公開（公告）號: CN102879584A
• 公開（公告）日: 2013-01-16
• 發明（設計）人: 錢令嘉;弓景波;王新興;戰銳;杲修杰
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院基礎醫學研究所
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/531
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 陳波

1.一種人血液HSP70抗體膠體金標檢測試紙條，其特征在于：包括設在固定板（1）上依次相連的樣品墊（2）、金標墊（3）、硝酸纖維素膜（4）和吸水紙（9）；在硝酸纖維素膜（4）上設有三條平行的第一檢測線抗原（5）、第二檢測線抗原（6）、第三檢測線抗原（7）和一條質控線抗體（8）；在金標墊（3）上設有金標抗原。

2.根據權利要求1所述的人血液HSP70抗體膠體金標檢測試紙條，其特征在于：所述固定板（1）為具有壓敏膠的PVC板材，樣品墊（2）為玻璃纖維膜，金標墊（3）為聚酯纖維膜。

3.根據權利要求1所述的人血液HSP70抗體膠體金標檢測試紙條，其特征在于：所述金標抗原為顯色抗原，檢測線抗原為捕捉抗原，顯色抗原與捕捉抗原能同時和人HSP70抗體結合形成雙抗原夾心；顯色抗原和捕獲抗原為原核重組表達的人HSP70蛋白。

4.根據權利要求1所述的人血液HSP70抗體膠體金標檢測試紙條，其特征在于：所述金標抗原用粒徑為20nm-60nm的膠體金標記。

5.根據權利要求1所述的人血液HSP70抗體膠體金標檢測試紙條，其特征在于：所述質控線抗體為兔抗人HSP70多克隆抗體。

6.一種權利要求1所述的人血液HSP70抗體膠體金標檢測試紙條的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）用常規的檸檬酸三鈉還原法制備均勻粒徑為20nm-60nm的膠體金；

（2）調節膠體金pH為8.5-9，然后加入顯色抗原與其反應，其中顯色抗原的濃度為0.02mg/ml，離心得沉淀，重懸沉淀，得金標抗原溶液，將金標抗原溶液噴印在聚酯纖維膜，晾干；

（3）將捕捉抗原用稀釋液稀釋成濃度為1mg/ml的捕捉抗原溶液，用噴墨儀將捕捉抗原溶液在硝酸纖維素膜上噴劃三條平行檢測線，真空干燥；

（4）將兔抗人HSP70多克隆抗體用稀釋液稀釋成濃度為0.5mg/ml的兔抗人HSP70多克隆抗體溶液，用噴膜儀將抗體噴線在硝酸纖維素膜上形成質控線，真空干燥；

（5）按樣品墊、金標墊、硝酸纖維膜、吸水紙順序粘貼在固定板上，切條，裝入塑料袋，干燥包裝。

7.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，離心的方法為：反應液于5000xg離心30min，沉淀用1wt%?牛血清白蛋白溶液重懸浮，反復2次；其中1wt%?牛血清白蛋白溶液為10mM?的Tris-HCl?緩沖溶液，pH為8.5，含1wt%的牛血清白蛋白。

8.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，步驟（2）中重懸沉淀的溶液為：20mM?的Tris-HCl緩沖溶液，pH為8.5，含30wt%的海藻糖，1wt%?的牛血清白蛋白，1wt?%的酪蛋白，體積濃度為0.01%的?Tween-20，0.02?wt?%?的NaN3。

9.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述稀釋液為10mM?的磷酸鹽緩沖溶液，pH為7.6，其中含10wt%的海藻糖，體積濃度為3%的甲醇。