[發明專利]測定水中As (III)的適配體-納米金共振瑞利散射光譜法

無效

• 申請號: 201210364306.6
• 申請日: 2012-09-26
• 公開（公告）號: CN102998288A
• 公開（公告）日: 2013-03-27
• 發明（設計）人: 蔣治良;梁愛惠;唐美玲
• 申請（專利權）人: 廣西師范大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 桂林市華杰專利商標事務所有限責任公司 45112
• 代理人: 劉梅芳

技術領域

本發明涉及分析化學，具體是測定水中As?(III)的適配體-納米金共振瑞利散射光譜法。

背景技術

砷是重要的環境污染物之一，以原礦或氧化物的形式逸散到周圍環境中，對大氣、水體、農作物等造成污染。砷可從呼吸道、消化道及皮膚進入人體，進入體內的砷排出緩慢，可長期蓄積，對人類健康造成了很大的威脅。在環境和生物樣品中，砷主要以As(III)和As(Ⅴ)的形式存在，且三價砷的毒性大于五價砷，世界衛生組織推薦10?ng/mL作為飲用水的最新標準。因此，建立一種高靈敏度、高選擇性檢測砷離子的方法，對于環境保護和人類健康都具有很重要的意義。目前，砷的分析方法主要有比色法，電化學法，熒光法，化學發光法，原子吸收光譜法，電感耦合等離子體質譜法等。但這些方法有的需要昂貴且復雜的儀器設備，有的方法復雜，有的靈敏度欠佳，有的選擇性欠佳，使得這些方法的使用受到了一定的限制。

核酸適配體是一段由十幾個或幾十個核苷酸組成的單鏈寡聚核苷酸。由于核酸適配體具有精確識別、易體外合成與修飾、穩定性好等特性，能夠特異性結合靶物質，已用于分析和臨床檢驗。共振瑞利散射光譜法是一種簡便、快速、靈敏的光譜分析新技術，在核酸、蛋白質、小分子分析等領域獲得了較好的應用。它與適配體反應結合，已建立了一些高靈敏高選擇性的共振瑞利散射光譜法。納米金具有穩定性好、生物相容性好及共振瑞利散射效應，在適配體分析和共振瑞利散射光譜分析已有應用。據我們所知，有關適配體修飾納米金共振瑞利散射光譜法檢測砷離子未見報道。

發明內容

本發明的目的是為克服現有技術的不足，而提供一種簡單快速測定水中As?(III)的適配體-納米金共振瑞利散射光譜法。

實現本發明目的的技術方案是：

應用適配體-納米金共振瑞利散射光譜法測定As?(III)的方法，包括如下步驟：

（1）制備納米金適配體探針（AussDNA）：取序列為5’-TTACAGAACAACCAACGTCGCTCCGGGTACTTCTTCATCG?-3’的單鏈DNA（ssDNA），用二次蒸餾水溶解至濃度為390?nmol/L。移取57.9?μg/mL?納米金6.0?mL于錐形瓶中，在攪拌條件下緩慢加入1.8mL?390?nmol/L?ssDNA溶液，加完后繼續攪拌15min，密封4℃保存。以ssDNA計算，該AussDNA濃度為90?nmol/L；

（2）制備As(III)標準溶液體系：取5支刻度試管，依次移取50～300?μL?90?nmol/L?AussDNA，100～250μL?50?mmol/L?pH?8.2?的4-羥乙基哌嗪乙磺酸鈉緩沖溶液(HEPES，含150?mmol/L?NaCl)，再分別加入1～60?μL的5760?ng/mL?As(III)?標準溶液，混勻，置于超聲波儀上超聲15?min，再加入20～80?μL?2.0?mol/L?NaCl溶液，用二次蒸餾水定容至1.5?mL，混勻；

（3）制備空白對照溶液：用步驟（2）的方法不加As(III)標準液制備空白對照溶液；

（4）分別取按步驟（2）、(3）制備的As(III)標準溶液及空白對照溶液適量，置于比色皿中，于熒光分光光度計上，同步掃描各溶液獲得共振瑞利散射光譜。278nm波長處測定As(III)標準溶液的共振瑞利散射峰強度I，并測定其空白對照溶液的共振瑞利散射峰強度值(I₀)，計算ΔI?=I-?I₀；

（5）以ΔI對As(III)的濃度關系做工作曲線；

（6）被測物樣品測定：取含有As(III)的被測物水樣；然后移取一定量替換As(III)標準溶液，按步驟（2）～（4）操作。算出被測物的ΔI_樣＝I_樣-I₀?；

（7）根據樣品測得的ΔI_樣，查步驟（5）的工作曲線，計算出被測物水樣中As(III)的濃度。