[發(fā)明專利]一種癌胚抗原單抗及包含該抗體的芯片以及應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210363829.9
• 申請日: 2012-09-26
• 公開（公告）號: CN102838676A
• 公開（公告）日: 2012-12-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李彬
• 申請（專利權(quán)）人: 李彬
• 主分類號: C07K16/30
• 分類號: C07K16/30;G01N33/68;G01N33/577;C40B40/10
• 代理公司: 北京集佳知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 馮瓊

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物工程技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種癌胚抗原單抗及包含該抗體的芯片以及應(yīng)用。

背景技術(shù)

癌胚抗原（CEA）是一種酸性蛋白，最初發(fā)現(xiàn)于結(jié)腸癌和胎兒腸組織中，故名癌胚抗原。癌旁正常粘膜CEA含量很少或為陰性。胃癌的CEA陽性率85.58%。其中粘液腺癌及印戒細胞癌（粘液細胞癌）為100%。電鏡下見CEA同時分布于癌細胞膜，及癌細胞內(nèi)胞質(zhì)內(nèi)的蛋白合成及轉(zhuǎn)運的細胞器（如核膜、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基器及其分泌小泡）中。CEA升高常見于大腸癌、胰腺癌、胃癌、小細胞肺癌、乳腺癌、甲狀腺髓樣癌等。但吸煙、妊娠期和心血管疾病、糖尿病、非特異性結(jié)腸炎等疾病，15%～53%的病人血清CEA也會升高，所以CEA不是惡性腫瘤的特異性標志，在診斷上只有輔助價值。此外，血清CEA水平與大腸癌的分期有明確關(guān)系，越晚期的病變，CEA濃度越高。除原發(fā)性結(jié)腸癌以外，腺胰癌、膽管癌、胃癌。食道癌、腺癌、肺癌、乳腺癌和泌尿系統(tǒng)的腫瘤陽性率也很高，一般在50－70%。良性腫瘤、炎癥和退行性疾病，如結(jié)腸息肉、潰瘍性結(jié)腸炎、胰腺炎和酒精性肝硬化變病人CEA也有部分升高，但遠遠低于惡性腫瘤，一般小于20μg/L，CEA超過20ng/ml時往往提示有消化道腫瘤。所以測定CEA可以作為良性與惡性腫瘤的鑒別診斷依據(jù)。

本項目主要應(yīng)用與在食管癌、肝癌、乳腺癌、前列腺癌、胃轉(zhuǎn)移癌等惡性腫瘤相關(guān)蛋白領(lǐng)域創(chuàng)立抗體芯片檢測技術(shù)平臺，自主研發(fā)48種惡性腫瘤標志物抗體芯片檢測試劑盒（抗體芯片）完全是由中國人自主開發(fā)，應(yīng)用這一芯片，可通過多種方式、多種渠道、多層面檢測惡性腫瘤標志物的效價和含量，將檢測靈敏度由ug提高到ng級，從而達到更準確、更全面的效果，其檢測結(jié)果可指導(dǎo)臨床治療。48種惡性腫瘤標志物抗體芯片檢測試劑盒（抗體芯片）對促進我國生物高技術(shù)前沿領(lǐng)域的發(fā)展具有重大鼓舞作用，對提升我國生物芯片技術(shù)、產(chǎn)品和市場的國際競爭力具有重大意義，此方法完全符合分子免疫學(xué)原理。目前國外幾乎所有的主要制藥公司都不同程度地采用了生物芯片技術(shù)來尋找藥物靶標，查檢藥物的毒性或副作用及進行藥物產(chǎn)品的定量和定性。用芯片技術(shù)進行大規(guī)模的藥物篩選可以省略大量的動物試驗，縮短藥物篩選所用時間，從而帶動創(chuàng)新藥物的研究和開發(fā)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種癌胚抗原單抗及包含該抗體的芯片以及應(yīng)用。

本發(fā)明的整體技術(shù)構(gòu)思是：利用自主設(shè)計合成的癌胚抗原（CEA）多肽（序列為TQQAT?PGPAYSGREI）經(jīng)免疫動物、細胞融合、亞克隆及酶聯(lián)免疫吸附實驗進行特異性篩選技術(shù)，獲得高效價、高特異性抗人癌胚抗原單克隆抗體，由于此單抗效價高、特異性好，與另外47種與腫瘤相關(guān)的單克隆抗體點制的抗體芯片，結(jié)合CY3標記的補體C3抗體與被檢產(chǎn)品建立了完整的檢測系統(tǒng)，用于檢測48種惡性腫瘤標志物蛋白質(zhì)含量。此抗體芯片具有靈敏度高,特異性好、操作簡單、高通量等優(yōu)點,可用于臨床和體檢血清的監(jiān)測和質(zhì)控。

一種癌胚抗原的單克隆抗體，其重鏈可變區(qū)氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示，其輕鏈可變區(qū)氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示；或其重鏈可變區(qū)由SEQ?ID?NO.1所示的氨基酸序列經(jīng)過取代、缺失、或添加一個或幾個氨基酸衍生的與SEQ?ID?NO.1的氨基酸序列至少有95%的一致性，輕鏈可變區(qū)由SEQ?ID?NO.2所示的氨基酸序列經(jīng)過取代、缺失、或添加一個或幾個氨基酸衍生的與SEQ?ID?NO.2的氨基酸序列至少有95%的一致性且所述單克隆抗體具有特異性結(jié)合癌胚抗原的特性。

作為優(yōu)選，所述單克隆抗體包括單鏈抗體、雙鏈抗體、嵌合抗體、人源化抗體、以及上述抗體的衍生物、功能等同物和同源物，也包括抗體片段和含有抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的任何多肽。

本發(fā)明所述“抗體”應(yīng)該解釋為涵蓋具有所需特異性的結(jié)合結(jié)構(gòu)域的任意特異性結(jié)合因子。因而，這個術(shù)語涵蓋了與之同源的抗體片段、衍生物、人源化抗體以及抗體的功能等同物和同源物，也包括含有抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的任何多肽，無論是天然的還是合成產(chǎn)生的。抗體的實例是免疫球蛋白亞型(如IgG，IgE，IgM，IgD和IgA)及其亞型亞類；也可以是包含抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的片段如Fab、scFv、Fv、dAb、Fd；和雙鏈抗體(diabodies)。融合至另一多肽的、包含抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的嵌合體分子或者等同物也包括在其中。嵌合抗體的克隆與表達在EP．A-0120694和EP．A．0125023中描述。