[發明專利]基因突變型重組蛋白酶K及其工業化生產方法

有效

• 申請號: 201210363700.8
• 申請日: 2012-09-26
• 公開（公告）號: CN102839165A
• 公開（公告）日: 2012-12-26
• 發明（設計）人: 安海謙;魯剛偉;冉波;任玉珍
• 申請（專利權）人: 金普諾安生物科技（蘇州）有限公司
• 主分類號: C12N9/60
• 分類號: C12N9/60;C12N15/57;C12N15/63;C12N15/81;C12N1/19;C12R1/725;C12R1/84;C12R1/72;C12R1/78;C12R1/88;C12R1/645
• 代理公司: 北京信慧永光知識產權代理有限責任公司 11290
• 代理人: 張淑珍;王維玉

1.基因突變型重組蛋白酶K，其特征在于：將如SEQ?ID?NO.2所示的氨基酸序列第151位的Y突變為A、第208位的K突變為H、第273位的S突變為T、第293位的G突變為A、第332位的K突變為R、第337位的S突變為N。

2.如權利要求1所述的基因突變型重組蛋白酶K，其中，所述基因突變型重組蛋白酶K還具有下述任意一種以上的突變：

（1）第123位的S突變為A；

（2）第180位的L突變為I。

3.如權利要求1或2所述的基因突變型重組蛋白酶K，其中，所述基因突變型重組蛋白酶K的C端還具有六聚組氨酸標簽。

4.編碼如權利要求1-3中任一項所述的基因突變型重組蛋白酶K的DNA。

5.如權利要求4所述的DNA，其中，所述DNA為SEQ?ID?NO.6-9所表示的核苷酸序列的全部或部分，所述部分至少具有SEQ?ID?NO.6-9第7-1113位的核苷酸序列。

6.包含如權利要求4或5所述的DNA的表達載體，其中，所述表達載體優選為pPICZ、pPICZα、pGAPZ、pGAPZα、pGAPZαA和pPIC9K。

7.導入權利要求6所述的表達載體的轉化細胞，其特征在于，所述轉化細胞為畢赤酵母（Pichia）細胞、假絲酵母（Candida）細胞、多型漢遜酵母（Hansenula?polymorpha）細胞、球擬酵母（Torulopsis）細胞、裂殖酵母（Schizosaccharomyces）細胞和克魯維酵母（Kluyveromyces）細胞，其中，所述轉化細胞優選為畢赤酵母細胞。

8.試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包含選自于如下物質中的一種或多種：權利要求1-3任一項所述的基因突變型重組蛋白酶K；權利要求4或5所述的DNA；權利要求6所述的表達載體；及權利要求7所述的轉化細胞。

9.制備如權利要求1-3任一項所述的基因突變型重組蛋白酶K的方法，所述方法包括如下步驟：在培養基中培養如權利要求7所述的轉化細胞；以及收集所述培養基中的所述基因突變型重組蛋白酶K。

10.如權利要求9所述的方法，該方法進一步包括所述基因突變型重組蛋白酶K的純化工藝過程，所述純化工藝過程包括離心分離、層析分離、脫色處理和凍干，其中，所述層析分離優選為利用組氨酸標簽進行的金屬離子螯合親和層析。