[發明專利]一種預防及治療瘢痕的疫苗及制備方法

無效

• 申請號: 201210361718.4
• 申請日: 2012-09-25
• 公開（公告）號: CN102836424A
• 公開（公告）日: 2012-12-26
• 發明（設計）人: 胡大海;石繼紅;朱雄翔;韓軍濤;胡曉龍;方小兵;白曉智;蔡維霞;湯朝武
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第四軍醫大學
• 主分類號: A61K39/00
• 分類號: A61K39/00;A61P17/02
• 代理公司: 西安吉盛專利代理有限責任公司 61108
• 代理人: 邱志賢

技術領域

本發明涉及一種疫苗，特別是一種預防及治療瘢痕的疫苗及制備方法，屬于醫藥領域。?

背景技術

白細胞介素10（IL-10）是多種細胞產生的重要免疫調節細胞因子，具有廣泛的生物學活性，包括免疫抑制、抗炎及免疫調節特性，主要生物學功能是限制和終止炎癥反應，調節多種免疫細胞的分化和增殖。體內外和動物實驗表明IL-10在炎癥、惡變和自身免疫性疾病方面都發揮了重要功能。在臨床上應用于治療急、慢性炎癥疾病、自身免疫性疾病如炎性腸炎、類風濕性關節炎、克隆病、多發性硬化癥、銀屑病等。?

IL-10作為一種炎癥反應調節抑制因子，具有：①調整炎癥細胞的募集和分化，減少前炎癥細胞因子的分泌；②減少胞外基質（ECM）的產生，上調蛋白水解酶（如基質金屬酶）增加ECM的降解；③下調TGF-β1的活性及表達，拮抗瘢痕增生的作用。Renovo公司利用重組hIL-10作為治療瘢痕增生，改善瘢痕外觀的候選藥物已進入III期臨床研究，但存在著缺乏對病理部位的特異性、用藥次數多、時間長及純化工藝繁雜等缺點。?

膠原蛋白過度沉積是瘢痕組織的重要特征，而CBD多肽（TKKTLRT，7肽）是能夠特異結合膠原蛋白的多肽序列。將編碼人hIL-10基因、CBD基因與真核表達載體pcDNA3.1(+)在基因水平融合，構建了預防和治療瘢痕的核酸疫苗。經Balb/C小鼠傷口愈合模型試驗證實，該疫苗在一定時間內能夠誘導小鼠合成分泌?hIL-10-CBD，分泌的hIL-10-CBD蛋白能夠與傷口愈合過程中細胞產生的膠原蛋白特異結合，既可以降低疫苗量及治療成本，又能夠在瘢痕部位有效地發揮藥理作用，從而達到預防及治療瘢痕的形成，改善瘢痕外觀的療效。?

發明內容

本發明的目的是提供一種預防及治療瘢痕的疫苗及制備方法，該疫苗是一種核酸疫苗，是由編碼人白細胞介素10（human?interlenkin?10,hIL-10）基因、膠原特異結合的多肽CBD基因與真核表達載體pcDNA3.1(+)在基因水平融合后構成。經Balb/C小鼠傷口愈合模型試驗證實，該疫苗在一定時間內能夠誘導小鼠合成分泌hIL-10-CBD，分泌的hIL-10-CBD蛋白能夠與傷口愈合過程中細胞產生的膠原蛋白特異結合，從而阻止了胞外基質的過度沉積而造成的纖維化。該疫苗用于預防及治療瘢痕的形成，改善瘢痕的外觀的作用。?

為實現上述目的，本發明采用的技術方案為：一種預防及治療瘢痕的疫苗，其特征是：它是由編碼人白細胞介素10基因、膠原特異結合的多肽CBD基因與真核表達載體pcDNA3.1(+)在基因水平融合后構成，其中，編碼人白細胞介素10基因簡稱hIL-10基因；融合后的hIL-10-CBD重組基因的核酸序列No1：?

5’atgcacagctcagcactgctctgttgcctggtcctcctgactggggtgagggccagcccaggccagggcacccagtctgagaacagctgcacccacttcccaggcaacctgcctaacatgcttcgagatctccgagatgccttcagcagagtgaagactttctttcaaatgaaggatcagctggacaacttgttgttaaaggagtccttgctggaggactttaagggttacctgggttgccaagccttgtctgagatgatccagttttacctggaggaggtgatgccccaagctgagaaccaagacccagacatcaaggcgcatgtgaactccctgggggagaacctgaagaccctcaggctgaggctacggcgctgtcatcgatttcttccctgtgaaaacaagagcaaggccgtggagcaggtgaagaatgcctttaataagctccaagagaaaggcatctacaaagccatgagtgagtttgacatcttcatcaactacatagaagcctacatgacaatgaagatacgaaacggtggtggtggttctaccaagaagac?c?ctccgcacc3’，其中3’，5’分別代表重組核酸鏈的3’，5’端。?

所述的hIL-10基因，其相應的核酸序列No2：?