[發明專利]一種基于羊傳染性膿皰病毒B2L基因的DNA疫苗載體及其制備方法和應用

無效

• 申請號: 201210361301.8
• 申請日: 2012-09-25
• 公開（公告）號: CN102888422A
• 公開（公告）日: 2013-01-23
• 發明（設計）人: 劉湘濤;張克山;劉永杰;孔漢金;尚佑軍;田宏;尹雙輝;逯忠新
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州獸醫研究所
• 主分類號: C12N15/79
• 分類號: C12N15/79;C12N15/39;C12N1/21;C12N15/66;A61K48/00;A61P31/20;C12R1/19
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;費碧華

1.一種基于羊傳染性膿皰病毒B2L基因的DNA疫苗載體，其特征在于所述的疫苗載體是通過將羊傳染性膿皰病毒主要免疫原性基因B2L基因插入到真核表達載體pVAX1內構建得到的。

2.如權利要求1所述的DNA疫苗載體，其特征在于所述的B2L基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

3.一種宿主細胞，其特征在于含有權利要求1或2所述的DNA疫苗載體。

4.如權利要求3所述的宿主細胞，其特征在于其為大腸桿菌DH5α。

5.一種構建權利要求1或2所述的DNA疫苗載體的方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）根據B2L基因完整編碼區設計一對引物，上下游引物P1和P2分別引入BamH?Ⅰ（GGATCC）和Xho?Ⅰ（CTCGAG）酶切位點，所述的引物序列如下所示：

上游引物P1：TTTGGATCCATGTGGCCGTTCTCCTC

下游引物P2：TTTCTCGAGTTAATTTATTGGTTTGC

（2）用引物P1，P2，在高保真DNA聚合酶作用下，以羊傳染性膿皰病毒DNA為模板，擴增B2L基因，電泳檢測并純化回收該片段；

（3）將步驟（2）得到的片段與pVAX1載體分別用限制性內切酶BamH?Ⅰ和Xho?Ⅰ進行酶切，分別獲得帶有粘性末端的B2L基因片段和PVAX1質粒片段；

（4）將步驟（3）得到的兩段片段連接，連接產物轉化大腸桿菌DH5α，鑒定正確后，通過小量提取或大量提取制備得到所述的DNA疫苗載體。

6.如權利要求5所述的方法，其特征在于步驟（2）中的擴增條件為95℃預變性5min后進入循環，循環參數為95℃?1min、57.5℃?1min、72℃?1min，35個循環后72℃延伸10min。

7.如權利要求5所述的方法，其特征在于擴增得到的B2L基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

8.權利要求1或2所述的DNA疫苗載體在制備預防羊傳染性膿皰疾病藥物中的應用。

9.一種用于預防羊傳染性膿皰的DNA疫苗，其特征在于含有權利要求1或2所述的DNA疫苗載體。